血清总IgE免疫放射分析.docVIP

血清总IgE免疫放射分析 【目的】 1、通过本实验了解免疫放射分析的测定原理及过程； 2、进一步了解RIA与IRMA的异同点。 【原理及意义】 采用二步夹心法测定血清中的总IgE。首先固相包被珠上的抗人IgE与待测IgE特异结合，洗涤后加125I一抗一人IgE，形成免疫复合物后洗涤并测珠子的放射性cpm值，根据标准曲线可计算出待物中的总IgE含量。在正常血清中，IgE含量最少，仅占Ig总量的0.002%，但含量稳定，主要来自鼻咽、扁桃体、支气管等处粘膜下的浆细胞。在特异性过敏症和寄生虫感染者血清中IgE浓度非常高。 【试剂与材料】 1、试剂：125I-IgE免疫放射分析试剂盒 （1）抗一IgE包被珠1瓶（100粒） （2）125I-抗-IgE溶液1瓶（21 ml） （3）样品稀释液：40 ml×2 （4）标准品：7瓶（S0-S6）浓度分别为0，0.1，0.4，1.6，6.4，12.8，25.6 IU/ml 2 ml/瓶 2、器材 （1）试管（13×78 mm）若干，试管架1个 （2）微量加样器10 μl、20 μl、50~250 μl、200~1000 μl各1只。 （3）记号笔或玻璃笔 （4）吸头各若干（与以上加样器配套） （5）水浴箱、吸液器各1台 （6）γ放免测量仪1套。 【操作程序】 1. 样品稀释 待测样品需1：41稀释，即400 μl样品稀释液+10 μl样品，或800 μl样品稀释液+20 μl样品； 2. 取反应试管若干并编号 3. 按编号加入标准品或已稀释过的待测样品各200 μl，并各加包被珠1粒；摇匀，45℃温育2小时； 4. 蒸馏水洗3~4次，每次洗后用吸液器吸干，每管洗涤总量不少于15 ml； 5. 每管加标记物200 μl，室温（20±4）℃ 20±4小时； 6. 洗涤同“4”。 7. 测量洗过留下的包被珠1分钟。 【计算】 1. 各管计数均应减去S0再进行计算。 2. 以标准点浓度为横坐标，cpm为纵坐标，双对数做图，根据曲线计算待测物浓度。 3. 使用计算机的IRMA程序。 4. 使用计算机（CAS10-FX3600P）的Log-Log程序 5. 样品中总IgE浓度 测定值×稀释倍数（40） 【注意事项】 所有试剂于使用前皆应于室温平衡1~2小时 不同批号与试剂盒的半成品不可混用。 测量时应将洗过的反应包被珠转入干净试管内测量。 参考正常值（IU/ml） 年龄 均值 范围 0~1 7.8 1~18 1~3 12.4 1.8~36 3~8 23 1.5~120 8~15 97 1~321 成年人 128.7 2~258 5. 试剂盒系北京北方生物技术研究所生产。