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免疫荧光方法
（2）实验方法 （1）用PBS浸洗准备好的细胞涂片3次，每次3min。 （2）0.1%的TritonX-100（用PBS配制）处理涂片5-10min。 （3）PBS洗净载玻片上的TritonX-100，加0.1%的牛血清白蛋白BSA溶液 用PBS配制 孵育固定好的细胞30min。 （4）弃去BSA，滴加0.1%BSA稀释的一抗 1:200 ，即软骨多糖诱导48hH22细胞免疫的小鼠血清，免疫湿盒中4℃过夜。同时用正常小鼠血清作对照。 （5）用PBS浸洗细胞涂片3次，每次3min，以确保一抗清洗彻底。 （6）避光条件下滴加BSA稀释的荧光标记的山羊抗小鼠IgG二抗 1:200 ，然后室温、暗室中孵育1.5-2h。 （7）PBS洗净荧光二抗，用荧光显微镜观察。 为了防止由于一抗未洗净带来的假阳性现象，实验中同时设置一组阴性对照，涂片染色操作步骤同上，把一抗换成PBS。 3.4.1.1免疫荧光染色法检测抗原、抗体结合情况将H22鼠肝癌细胞制成细胞涂片，分别以空白组小鼠血清、模型组小鼠血清和免疫组小鼠血清为一抗，经荧光二抗染色后得到免疫荧光检测结果，并计算各组细胞的阳性表达率，结果如图3-1所示。?? a b c d *P 0.01vs模型组,#P 0.01?vs空白组图3-1免疫荧光染色法检测抗体生成Fig.3-1?Theimmunofluorescent?staining?for?antibody?test图3-1中 a 、 b 、 c 一抗分别为空白组小鼠血清、模型组小鼠血清、免疫成功小鼠血清， d 为免疫荧光阳性表达率。从图3-1中可以看出，一抗为空白小鼠血清的荧光极弱，一抗为模型组小鼠血清的荧光仍然不强，而一抗为治愈小鼠血清的荧光很强，阳性表达率达到了90%以上。说明免疫成功小鼠血清中存在能与肿瘤抗原结合的特异抗体，免疫小鼠的体液免疫得到增强。血清中的特异性抗体是由与其相对应的肿瘤特异抗原激活B淋巴细胞产生的。CHCP免疫成功小鼠的抗血清与H22肝癌细胞发生特异性结合，说明CHCP中含有肿瘤特异抗原，该抗原能够帮助机体识别肝癌细胞并能促进机体B淋巴细胞的增殖和活化，提高机体的体液免疫能力。
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