第5章免疫血清学检验技术教案.ppt

增强液中非离子型的表面活性剂可以有效地将Eu3+ (β- NTA)3。 (TOPO)2复合物形成大分子的微囊, 微囊的内侧为疏水性基团，能有效地溶解脂溶性的(β- NTA)3。外层为 亲水性基团, 可以和水分子结合。 * 固相抗体和Eu3+标记抗体与待检抗原结合 * ALP：碱性磷酸酶 * 4－甲基伞形酮磷酸酯（4－MUP）； 4-甲基伞酮基β-D半-乳糖苷（ 4MUG ）； 对-羟基苯乙酸（HPA）。 * 簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。 * * * 四甲基联苯胺 TMB；5-氨基水杨酸5-ASA ；2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐 ABTS；邻苯二胺 OPD；； 对-硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 4-甲基伞酮基β-D半-乳糖苷（ 4MUG ） * * * * * * * * * * * * * * * * * * 向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（gold solution）。 * 阳性 阴性 固相膜 固相抗原 待测抗体 金标记抗人IgG抗体 人IgG 固相抗人IgG抗体 IFA--双抗体夹心法原理图 三、斑点金免疫渗滤试验 dot immunogold filtration assay, DIGFA/IFA 金 洗 样 IFA--快速检测（渗滤法）示意图 ICA--间接法测抗体 ICA--双抗体夹心法测抗原 四、免疫层析试验immunochromatography assay, ICA 样品垫 结合物垫 NC膜 吸水垫 阳性 阴性 无效 ICA 结果观察 五、斑点酶免疫吸附试验 dot enzyme linked immunosorbent assay, Dot-LISA 六、酶联免疫斑点试验 enzyme linked immunospot, ELISPOT 细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后， 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。 BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过 CTL 公司生产的 ELISPOT 酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。 ELISPOT结果判断 Westernblot——抗原表位可能被破坏而漏检 七、免疫印迹法--Westernblot 放射免疫沉淀试验——抗原表位不会破坏 八、放射免疫沉淀试验 * * 有些细菌即使用生化反应很难区别，但其细菌抗原成份（包括菌体抗原、鞭毛抗原）却不同。利用已知的特异抗体测定有无相应的细菌抗原可以确定菌种或菌型；检测抗原的另一优点为在应用了抗生素治疗后，细菌生长被抑制，利用培养方法不能检出的细菌，如果在短期内检出抗原，将有助于明确病因；个别情况下还可利用噬菌体对细菌抗原型别分析，用于流行病学追踪调查。 * Supernatants，上清液；myoglobin，肌红蛋白；polyclonal antiserum，多克隆抗体； * * 肥达氏试验(Widal test)，伤寒或副伤寒的诊断；外裴二氏试验(Weil-felix test)，斑疹伤寒及恙虫病的诊断；瑞特氏实验(Wright test)，布鲁氏菌病的及诊断。 布鲁菌病(brucellosis，布病)，也称波状热，是布鲁菌引起的急性或慢性传染病，属自然疫源性疾病，临床上主要表现为病情轻重不一的发热、多汗、关节痛等。传染源羊在国内为主要传染源，其次为牛和猪。病菌可由皮肤、消化道、呼吸道粘膜、眼结膜和性器官粘膜进入体内。 * SPA：葡萄球菌A蛋白质（staphylococcal protein A， SPA），多数金黄色葡萄球菌细胞壁内含有的一种特殊蛋白质。一个分子内有4个相似的活性部位，能与人及多种哺乳动物（猪、兔、豚鼠等）血清中IgG类抗体的FC段非特异性结合。 * Coombs试剂：抗人球蛋白 * Coombs试剂：抗人球蛋白 * 有时出现扩散圈呈两重沉淀环的双环现象。这是由于出现了不同扩散率、但抗原性相同的两个组分 * 电渗：电场中溶液相对于固体的移动。琼脂是酸性物质，在碱性溶液中带负电，而与它接触的溶液带正电，因此液体向阴性移动。抗原抗体进行对流，在比例合适处形成沉淀线。 * 放射免疫RIA 以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体来测定待检样品中抗原量。 免疫放射IRMA 以过量标记抗体与抗原非竞争结合，采用固相免疫吸附载体分离游离和结合标记抗体。 * ⑴平衡法：将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8 -M