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- 2016-10-20 发布于重庆
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酸溶蛋白和粗蛋白测定
油 脂 的 检 验 与 分 析
粗蛋白质的测定(凯氏半微量定氮法)
测定原理 凯氏法的基本原理是将含有蛋白质的样品与浓硫酸共热使其分解,其中氮元素变成铵盐。再经浓碱液作用,放出的氨气经硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定硼酸溶液所吸收的氨。计算出试样含氮量,乘以相关的蛋白质换算系数,即得打蛋白质的含量。
消化:蛋白质与浓硫酸混合加热,蛋白质被炭化分解,其中碳被氧化成二氧化碳,所含的氮则转变成硫酸铵残留于消化液中。
有机物(含N、C、H、O、P、S等元素)+H2SO4 CO2 ↑+(NH4)2SO4+H3PO4+SO2↑+SO3↑
由于上述反应进行的很慢,消化需要很长时间,加入催化剂可加速反应。硫酸铜是备用的催化剂,硫酸钾能提高硫酸的沸点,常将它们混合使用,起加速氧化、促进有机物分解的作用。
蒸馏:消化所得的硫酸铵加碱蒸馏,氨就被释放出来。
(NH4)2SO4+ 2NaOH=2 NH3·H2O+ Na2SO4
NH3·H2O=NH3↑+H2O
生成的氨用硼酸溶液吸收。硼酸吸收氨后,指示剂颜色变化,再用盐酸滴定,直至恢复到原来的氢离子浓度为止,盐酸与样品中氨是等摩尔反应。
2NH3+4 H3 BO3=(NH
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