实验一SDS法提取植物基因组DNA.docVIP

实验题目：SDS法提取植物基因组DNA 实验目的 学习和掌握常用基因组DNA提取方法。 实验要求 1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作； 2.获得高纯度、完整DNA样品。 三、实验原理 利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。 四、药品试剂及耗材： 药品试剂：液氮、提取缓冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入）、20% SDS ph7.2、5 mol/L KAc、氯仿：异戊醇（24：1）异丙醇 将液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转2 ml离心管中。 加入预热65℃的提取缓冲液μl 20%SDS 达到终浓度2% ，混匀，置65℃水浴中放置分钟加入5M的醋酸钾），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心0 min。Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液入另一离心管中。 加入氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15。 转移上清