课题研究的主要内容:
1 利用现代分离分析技术对八宝景天中有效抑菌成分进行分离,分析。
2 对植物各浸膏进行抑菌实验,筛选活性抑菌物质。
3 对提取物有效成分进行结构鉴定。
4 最终筛选出具有较好抑菌活性物质,即抑菌剂。
筛菌
一 抑菌成分的粗提取
取植物干粉50g,然后按照中药熬制方法(分别加水2000ml、1000ml和1000ml,熬3遍,每遍熬制到200~300ml,3遍滤液合并加热浓缩至500ml)制成水剂,经多层纱布过滤后再经细菌滤器过滤除菌,然后放入冰箱冷藏备用。
二 抑菌实验
(1)生长速率法
提取物对病原真菌菌丝生长抑制作用的测定采用生长速率法,设空白为对照。将提取物用无菌水配制成质量浓度为0.5 g.mL-1 ,0.25 g.mL-1 ,0.2 g.mL-1 ,0.15 g.mL -1,0.125 g.mL-1 ,0.1 g.mL-1 , 0.05 g.mL-1 ,0.03 g.mL-1 ,0.02 g.mL-1 ,0.01 g.mL-1 ,9个浓度梯度。
在无菌条件下,将供试菌种用0.4cm 的打孔器打出一定数量的菌饼备用[培养好的病原真菌平板用打孔器打成菌片,放入以平板中央,培养5d后以菌片为中心用打孔器打成菌片(主要为了菌龄一致)],待培养基溶化后,从高浓度到低浓度用吸管吸取1mL提取物,放入培养皿内,然后趁热倒入9mLPDA培养基于9
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