保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌.docVIP

1、使用鲜羊奶或奶粉制备酸奶 首先，羊奶或奶粉水溶物要进行杀菌处理。　将乳酸菌菌株（保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）接入经110 ℃/20min 灭菌的复原羊奶中，在43 ℃下发酵至凝乳。或者用奶粉时，脱脂奶粉, 加蒸馏水制成14%的复原脱脂乳液, 调节pH 值至6.5, 112℃灭菌10min, 冷却后备用。 2、两种菌种培养分离 保加利亚乳杆菌使用MRS培养基 嗜热链球菌使用Elliker培养基 测量 （1）、pH 值测定采用PHS- 3C 酸度计直接测定。 PHS—3C型精密PH计安全操作规程 1、开机----mV测量（mV指示灯亮）----按PH/mV----进入PH测量状态（PH指示灯亮）----按“温度”键设定溶液温度（温度指示灯亮）----按“确认”键回到PH测量状态。 2、将电极插入标准缓冲溶液1待读数稳定后按“定位”键调至该温度下标准溶液的PH值（PH指示灯闪烁，慢闪表示仪器进入标定、定位状态）。 3、按“确认”键回至PH测量状态（PH指示灯停止闪烁），将电极清洗后插入标准缓冲溶液2待读数稳定后按“斜率”键。调至该温度下标准溶液的PH值（PH指示灯闪烁，表明仪器进入标定斜率状态）。 4、按“确认”键回至PH测量状态（PH指示灯停止闪烁），标定结束，电极清洗后可对被测溶液进行测量。 5、如果被测溶液温度与标定溶液的温度不一致，用温度计测量出被测溶液的温度，然后按“温度”键，使温度显示为被测溶液的温度，再按“温度”键，即可对被测溶液进行测量。 A、PH计标定： 1、打开电源开关，按“PH/MV”按钮，使仪器进入PH测量状态； 2、按“温度”键使显示为溶液温度值（此时温度指示灯亮），然后按“确认”键，仪器确定溶液温度后回到PH测量状态。 3、把用蒸馏水清洗过的电极插入PH 6.86的标准溶液中，待读数稳定后按“定位”键（此时PH指示灯慢闪烁，表明仪器在定位标定状态）使读数为该溶液当前温度下的PH值。 4、把用蒸馏水清洗过的电极插入PH 4.00（或PH 9.18）的标准溶液中，待读数稳定后按“斜率”键（此时PH指示灯快闪烁，表明仪器在斜率标定状态）使读数为该溶液当时的PH值，然后按“确认”键，仪器进入PH测量状态，PH指示灯停止闪烁，标定完成。 5、用蒸馏水洗电极后即可对被测溶液进行测量。 B、PH计标定错误后补救措施 ▲ 如果标定过程中操作失败或按键错误而使仪器测量不正常，可关闭电源，然后按住“确认”键再开启电源，使仪器恢复初始状态。然后重新标定。 ▲ 标定后，“定位”键及“斜率”键不能再按，如果触动此键，此时仪器PH指示灯闪烁，请不要按“确认”键，而是按“PH/MV”键，使仪器重新进入PH测量即可，而无须再进行标定。 ▲ 标定的缓冲溶液一般第一次用PH 6.86，跌人次用接近溶液的PH值的缓冲液，如果被测溶液为酸性时，缓冲液应选PH 4.00；如被测溶液为碱性则选PH 9.18的缓冲液。 （2）、活菌计数采用稀释平板活菌计数法[4] , 37℃,培养36～48h。 器材 大肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL、5mL无菌吸管，无菌平皿，无菌水，无菌试管，试管架和记号笔等。 操作步骤 1、编号 取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2、稀释 用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。 将10-1试管充分振荡、混匀。另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回吹吸菌液三次，进一步将菌体分散、混匀。动作不要太猛太快，吸时插入，吹时提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推， 3、取样 用三支1ml无菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mL 4、倒平板 尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至45度的LB培养基约15-20ml，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀。 5、培养 倒置于37度培养箱中培养48小时， 6、计数 算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算； 每毫升中菌落形成单位（cfu） 同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5 五、实验报告 1、结果 将培养后菌落计数结果填入下表： 稀释度 10-4 10-5 10-6 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 Cfu数/平板 每毫升的cfu数