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金桔红掌离体培养的研究 　　摘 要：以金桔红掌叶片为实验材料，对外植体最佳消毒时间及增殖培养方案的优化进行了研究。结果表明，外植体最佳消毒时间为16min；增殖培养的最佳培养基为3/5MS+6-BA 0.2mg/L+IBA 0.05mg/L+NAA 0.03mg/L；过渡培养的最佳培养基为MS+活性炭1g/L+蔗糖35g/L。 　　关键词：金桔红掌；叶片；消毒时间；增殖培养；过渡培养 　　中图分类号 S682 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）13-41-03 　　红掌（Authurium undreanum）为天南星科花烛属多年生常绿草本植物[1]，原产于中南美洲哥伦比亚西南部，是一种很好的盆花和切花植物。红掌花叶优美，高贵典雅，是目前国际花卉市场上流行的一种名贵花卉，成为仅次于热带兰的第二大热带花卉商品。红掌由法国著名植物学家Elouard Andr在1896年从哥伦比亚西南部引种到欧洲，比利时人Jean Linden率先栽培并开始销售，从此便作为商品开始风靡全球。但由于红掌用常规分株繁殖难以扩大生产，而播种繁殖要经人工授粉才能获得种子，耗费人力，所以组织培养成为红掌快速繁殖的唯一途径。自Pierik[2]于1974年对红掌进行组织培养取得成功以来，国内外学者对其进行了大量的组织培养的研究，但绝大多数的研究仅限于某一品种或单一器官（茎尖研究最多）。1986年Keller等研究用MS. skoog培养基作叶插（加KT 2mg/L），1～2个月可形成愈伤组织。1990年，Lightboarn等报道0.5mg/L的2，4-D对愈伤组织的诱导效果最好，增加NH4NO3浓度可使叶片愈伤组织增殖加快。1999年，Kuehrle-A等用4种杂交种幼苗的叶进行组培，发现在暗培养1个月后有半透明的胚胎发生。23个月后，用MS+6-BA 0.2mg/L+2.0%蔗糖继代培养，成苗后移入温室。1993年，复旦大学研究表明[3]，在幼苗微培养中，昼长夜短可诱导愈伤组织生长；3.0%葡萄糖对愈伤组织形成是最有效的。我国从1998年开始研究[4]，现已成功掌握了植株再生体系的建立、继代增殖培养、壮苗和生根培养、移栽和温室育苗等技术。研究人员通过采用不同的器官作为外植体，对不同培养基进行筛选比较，总结出一套较为完整的操作流程。不同的品种培养技术会有差异，在不断引进新品种的同时研究其组织培养技术具有现实意义。 　　金桔红掌（Anthurium Golden Orange）为天南星科花烛属，叶宽椭圆状心脏形，全缘，绿色，是从红掌变异品种中经过选育而成的具有观赏潜力的新品种。笔者以金桔红掌为原材料，对外植体最佳消毒时间及增殖培养方案的优化进行了研究，其目的是降低污染率，从而提高金桔红掌的成活率以及金桔红掌的增殖倍率，对金桔红掌的离体培养有重要意义，也为以后红掌新品种的选育作一个参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 实验于2012年春在广东华力园艺有限公司实验基地进行。材料为金桔红掌叶片，金桔红掌从该公司华伦天奴品种中选出。株高31.8cm，叶宽椭圆状心脏形，全缘，绿色。花梗从叶腋处抽生，佛焰苞苞片长6.9cm，宽7.2cm，苞片颜色前期为桔红色，顶部带绿色。花序长4.8cm，粗为1cm，花序初为桔黄色，后为下白上桔红，之后逐渐变为绿色。花梗长31.3cm，桔红色至暗红色。 　　1.2 方法 　　1.2.1 金桔红掌外植体消毒时间试验 选择好的母株置于干净、通风良好的温室中，整个处理过程中不施肥、不浇水，处理后植株呈萎蔫状态，基质土壤不湿润、不沾手即可做种。选择无病虫害植株的叶片，在预处理室通过精心处理之后用0.05%洗衣粉溶液清洗3～5min，然后带回接种室，再用1‰的升汞溶液分别消毒12、16、18min，消毒完毕后用无菌水清洗3～5遍，切下叶片四周升汞侵蚀部位，接种于培养基中。外植体为金桔叶片，每个处理16片；诱导培养基：MS，pH值6.0；La（卡拉胶）5.5g/L；蔗糖30g/L。培养条件：光照强度1 500lx左右，光照时间12±0.5h/d，温度26±1℃，培养周期为6周（图1）。 　　[母本图片][外植体][初代愈伤长势][初代切割后] 　　图1 实验材料 　　在培养6周后，观测真菌污染数、细菌污染数，计算真菌污染率、细菌污染率及成活率，计算方法为：真菌污染率（%）=真菌污染数/接种总数×100，细菌污染率（%）=细菌污染数/接种总数×100，成活率（%）=成活数/接种总数×100。 　　1.2.2 金桔红掌芽的增殖诱导培养基优选 选择经过31周继代培养的生长良好的健康金桔红掌苗作为实验材料，在超净工作台上进行接种，其接种操作方法为：按方向性切割，2～3芽/团，芽高5～15mm