黄花蒿中黄酮类分的分离与鉴定.docVIP

黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定 卜俊恒 内蒙古医学院 呼和浩特010059 摘　要　目的：在对中药黄花蒿进行了活性研究之后建立了一种高效液相色谱-串联核磁共振同时测定中药黄花蒿中黄酮类成分的方法.使用Phenomenex Luna,C18色谱柱,流动相为甲醇—水溶液(67∶33),在检测波长230nm下,分离出黄花蒿有效成分组中4个主要的成分，这些成分分别属于生物萜类、黄酮类；并采用核磁共振方法鉴定其结构。结果显示:本实验共鉴定出四种成分，分别是：猫眼草黄素·槲皮万寿菊素·猫眼草酚·青蒿酸。对于上溯有效成分进行鉴定,能为更好地阐明中药黄花蒿的有效成分及作用机制提供依据。 关键词　黄花蒿；黄酮类化合物；高效液相色谱-串联核磁共振 黄花篙又名青篙，为菊科植物黄花篙Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清热解暑、除蒸、截疟等功效[1]。20世纪70年代我国学者[2]从中分离得到的青蒿素,是含有过氧基团的倍半萜内酯类化合物,治疗恶性脑疟及抗氯喹株疟疾等疾病具有高效、速效、低毒等特点,是重要的抗疟药物[3]。对于黄花蒿的研究目前主要是从植物中提取分离青蒿素，由于各种黄花蒿中的有效成分含量差别很大，有些含量很低，药用价值不大[4]。且如果黄花蒿中的有效成分含量低于5‰，就没有工业提取价值。目前主要的测定方法有结晶称重法、TLC法、HPLC法[3]等，由于青蒿素只有末端吸收，因此需经柱前衍生后才能测定[5]，也有人采用HPLC-ELSD方法测定[6]。黄花蒿ArtemisiaannuaL.的主要活性成分为青蒿素,含量较低,而其中的某些黄酮类化合物可促进青蒿素与血晶素的反,增强青蒿素的抗疟性。对于黄花蒿的研究,长期以来的重点都集中于其抗疟活性成分青蒿素及其类似物上,对其中含量较高的黄酮类化合物的研究尚未见报道。作者提出高效液相色谱-串联核磁共振方法,可同时定性、定量分析青蒿素和黄酮类化合物。 1　实验部分 1．1仪器与材料 高效液相色谱-串联核磁共振(日本岛津—8A二元泵，,核磁共振检测器,色谱柱填料：PRC—ODS 色谱柱内径：2*25cm)。药材自采; 甲醇为色谱纯；酸度计(DELTA320)(上海)有限公司；纯水机:上海医疗仪器厂水为二次蒸馏水。 2　样品处理 药材混合后粉碎,用乙醇—水(55:45)加热回流提取3次,残渣用乙醇加热回流提取3次,合并提取液,回收溶剂,得到总黄酮。 3　实验条件 色谱柱(2*25cm);柱温25℃,流速0. 2mL/min。进样量5μL。流动相：甲醇—水（67:33）检测波长230nm，在此检测波长之下理论塔板数大于2000。分离度符合要求。 2　结果 2. 1　色谱条件的优化 1. 1 色谱柱 使用SymmetryShieldTM RP18色谱柱(150mm×3.9mm, ID=5μm)得到的色谱图中峰数较少,且峰较宽;换用Phneomnexe Luna C18色谱柱(250mm×4. 6mm, ID=5μm)后峰数明显增多,且峰较尖锐. 1. 2　检测波 测定样品溶液的光谱图,提取从250~350nm的谱图,结果表明:在230mn波长为其最适波长。能够；兼顾各种种生物碱的分离完全且分析方法的灵敏度高,样品的整个色谱图图形良好. 2.1. 3　柱温 设置为20℃时发现温度受外界影响较大,基线有时漂移且重复性不好;适当提高柱温至25℃能够克服以上缺陷,基线平稳且使分离较好. 2.1. 4　甲醇与水的比例 分别采用了甲醇-水溶液为(50∶50)、(62∶38)、(67∶33)、(70∶30)、(75∶25)不同比例的流动相,分析样品溶液.结果表明:甲醇-水溶液比例为67∶33时,整个色谱图中大部分峰的峰形和分离度都较好;甲醇比例减小,峰形变宽保留时间延长并出现大包;甲醇比例增大,峰形变窄保留时间缩短,且出现部分重叠.故选择甲醇-水溶液(67∶33). 2.2 核磁法鉴定了其中的7个主要成分。见下图（—） 图(一) 成分的化学式 　 猫眼草黄素 Chryssplenetin 1 槲皮万寿菊素 Quercetagetin-3,7,3’4 -teramethylether 2 猫眼草酚 Chqysosplenol D 3 青蒿酸 Artemisinic acid 4 图（一）：1为猫眼草黄素；2为槲皮万寿菊素；3为猫眼草酚；4为青蒿乙素