现代分子生物学复习内容解析.doc

现代分子生物学 复习内容 一、DNA的变性（Denaturation）：DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。确切地就是维持双螺旋稳定性的氢键和疏水键的断裂。断裂可以是部分的或全部的，是可逆的或是非可逆的。DNA变性不涉及到其一级结构的改变。 1. DNA变形的条件：凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件，如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等,均可破坏双螺旋结构引起核酸分子变性。 2. DNA变性后发生的变化：DNA变性后原来隐藏在双螺旋内部的发色基团，成为单链而暴露出来，使DNA的物理和化学性质发生一些列的变化，这些变化包括： （1）DNA溶液的浓度大大下降。DNA双螺旋是紧密的刚性结构,变性后代之以“柔软” 而松散的无规则单股线性结构，DNA粘度因此而明显下降。 （2）溶液旋光性发生改变。变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变, 使DNA溶液的旋光性发生变化。 （3）增色效应或高色效应(hyperchromic effect)。DNA分子中碱基间电子的相互作用是紫外吸收的结构基础,但双螺旋结构有序堆积的碱基又“束缚”了这种作用。变性DNA 的双链解开,碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收,故而产生增色效应。 （4）生物活性丧失。 （5）浮力密度上升。 3. 引起DNA变性的主要因素： （1）加热（生理温度以上）。加热使DNA变性后，在260nm处的紫外吸收值明显上升，一般当DNA加热时，在260nm吸收值先缓慢上升，到达某一温度后又骤然上升，其特点是爆发式的，变性发生的范围很窄，其相变过程用Tm值描述。 （2）极端pH值。当pH为12时，碱基上的酮基变为烯醇基，影响氢键形成，从而改变Tm值，当pH为2～3时，碱基上的氨基发生质子化，也影响氢键形成。 （3）有机溶剂、尿素和酰胺等。当环境中存在酰胺或尿素时，它们可与DNA分子中的碱基形成氢键，从而使DNA分子保持单链状态，以利于分子克隆的操作。 4. Tm值大小的影响因素： （1）DNA的均一性。有二种含义，首先是指DNA分子中碱基组成的均一性,如人工合成的只含有一种碱基对的多核苷酸片段,与天然DNA比较,其Tm值范围就较窄。其次还包含有待测样品DNA的组成是否均一的意思,如样品中只含有一种病毒DNA,其Tm值范围较窄, 若混杂有其它来源的DNA,则Tm值范围较宽。 （2）DNA的(G+C)含量。在溶剂固定的前提下，Tm值的高低取决于DNA分子中的(G+C)的含量。(G+C)含量越高,即G-C碱基对越多,Tm值越高。 （3）介质中离子强度：DNA在离子强度较低度介质中Tm值较低，范围较宽；在高离子强度时，DNA的Tm值较高，范围较小。所以DNA在含盐的缓冲溶液中较为稳定。 二、DNA的复性（renaturation）：指变性DNA , 二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为 退火(annealing)。 1. DNA复性的条件： （1）一定的M NaCl （2）较高的温度：避免形成无规则氢键，但是不能太高，否则不能形成有规则氢键以维持双链结构。 2. 影响DNA复性的因素： （1）DNA分子的复杂程度。DNA序列越复杂，复性越慢，所需时间越长。 （2）DNA的浓度。同一种DNA分子，浓度越高，互补链碰撞机会越多，复性越快。 （3）DNA片段大小。DNA片段越大，复性越慢，因此，在复性研究时，一般要将其剪切成400bp大小的片段，以增加复性速度。 （4）温度。复性速度与温度直接有关，温度不宜过低，一般在Tm=25℃ （5）阳离子浓度。在小于0.5mol/L浓度时增加盐浓度有利于复性。 三、基因 1.基因的顺反子概念：现代分子生物学文献中，顺反子和基因这两个术语互相通用。一般而言，一个顺反子就是一个基因，1500～2000个核苷酸，它是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构（因为任何一个基因都是突变体或重组体）。有结构基因与调控基因的划分，还有重叠基因和断裂基因的发现。 2. 基因重叠的方式： （1）大基因内包含小基因。 （2）前后两基因首尾重叠。 （3）三个基因之间重叠。 四、基因组 1. 基因组的概念：基因组是指细胞内遗传信息的携带者-DNA的总体。基因组中不同的区域具有不同的功能，有些是编码蛋白质的结构基因，有些是复制及转录的调控信号，有些区域的功能尚不清楚。基因组结构是指不同功能区域在整个DNA分子中的分布情况。 2. 细菌染色体基因组结构的一般特点： （1）通常仅由一条环状双链DNA分子组成细菌的染色体相对聚集在一起，形成一个较为致密的区域为类核。只有一个复制起始点。 （2）具有操纵子结构，其中的结构基因为多顺反子，即数个功能相关