核酶的作用方式与技术进展教程范本.pptVIP

SELEX技术 SELEX技术即指数富集的配基系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)。利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的核酸适体(Aptamer)。 3. 表达量不高 核酶的切割活性依赖高浓度的表达量，当核酶表达量低时，不能达到有效的抗病效果。并且核酶的催化作用还依赖于病毒的滴度(邹建，2003)。在病毒滴度低(4.5 log10 TCID50)的时候其切割活性明显，病毒滴度较高(5.5 log10 TCID50)时，其切割活性显著降低，这可能和反义RNA浓度有一定关系。 锤头型核酶的催化机理 锤头型核酶对切割位点的识别遵守NHH规则（N代表任意核苷酸，H 代表A，U或C）。它的催化过程需要二价金属离子（如镁离子）的参与，人们提出两种催化机理：单金属离子催化和双金属离子催化。 图5 锤头型核酶两种可能的催化机理 （a）单金属离子催化；（b）双金属离子催化 。 单金属离子催化机理如图a，在这个模型中，金属氢氧化物作为广义碱从2’OH接受质子。活化的2’氧作为亲核试剂进攻切割位点的磷酸。双金属离子机理如图b。A位点的金属离子作为路易斯酸（Lewis acid）接受2’氧的电子，使2’OH去质子更容易。B位点的金属离子也作为路易斯酸