牦牛体外受精文献综述解析.doc

文献综述 论文名称:牦牛体外受精及早期胚胎相关基因表达研究 姓 名： 学 号： 专 业： 指导教师： 起止时间： 2014年12月 牦牛体外受精及早期胚胎相关基因表达研究 【摘要】通过阅读大量文献资料，对哺乳动物的体外受精和卵母体外培养精卵相互识别、结合，胚胎的早期发育等基本概念的有了初步了解。并且对牦牛体外受精胚胎的培养及培养条件优化，早期胚胎不同发育时期相关基因表达的研究等概念进行探究。 关键词：牦牛体外受精 卵母细胞体外培养 早期胚胎相关基因表达 Yak in vitro fertilization and early embryo related gene expression research 【abstract】By reading a large number of literature, in vitro fertilization of mammals and eggs outside the mother culture sperm egg identification, combined with each other, the understanding of the basic concepts such as the early development of embryos.And the study of the cultivation of the yak ivf embryos and culture conditions optimization, different development period of early embryo related gene expression research. Keywords: yak in vitro fertilization Oocyte in vitro culture early embryo related gene expression 一、体外受精的研究进展 体外受精技术是继人工授精技术,胚胎移植技术之后,动物繁殖领域的第三次革命。特别是近十年来,许多学者对此进行了大量的研究工作。并对相关领域,如胚胎细胞核移植技术,动物转基因技术,胚胎细胞性别鉴定技术及克隆动物技术等的研究,推动了体外受精技术向前发展,国外已从实验室转向商品化生产。随着生物胚胎技术研究的进一步深入,对于一些濒危动物(大熊猫,中国虎)和优良家畜品种的后代续繁,国际间品种交流,品种资源保存,打破时间和空间限制均有重大的现实意义和应用前景。哺乳动物体外受精研究可追溯到1878年,Suhenk首先在家兔上进行过尝试,至今已有120多年的历史了,但直到张民觉和Ausitn发现精子与卵子结合前,精子必须先获能,体外受精技术研究才有了突破性进展, 体外受精不仅依赖于卵母细胞的成熟培养和精子获能,而精子浓度、精卵相互作用的时间,培养液和培养温度、CO2含量等也是重要的影响因素。在牛的核移植胚胎中调亡最早出现在4-8细胞阶段，而受精胚胎中则出现在8-16细胞阶段.在牛羊上将经22-24小时培养的成熟卵母细胞,放入已经过处理的获能精子微滴中,精子含量约为1.5-2x106个/ilIT,38.5℃5%CO:,培养44-46小时,以分裂到2-8细胞阶段的胚胎作为受精结果评定。当然也有在受精后24小时,观察放出第二极体(PBn),作为受精评定标准。一般将受精17一24小时的卵置于实体显微镜下检查,见有卵丘收缩、脱落和卵周间隙(PV)S增大者,判定为已受精。 二、优良精子的制备 利用带放大6 000倍镜头的显微镜对睾丸穿刺获得精子进行安全、即时的形态分析。在不侵害精子,又不影响配子的进一步发育的前提下,取得形态正常、头部无空泡的精子行卵细胞胞质内单精子显微注射。在6 000倍下观察精子,可以清楚地观察到精子头部是否含有空泡及空泡的大小和数量,这是常规显微镜所不能分辨出来的,其优点也是显而易见的[13]。在精子活力较高的情况下,冷冻精液解冻后可不经上浮而直接离心即可用于体外受精[14]．，对于正常精液来说，密度梯度离心后精子回收效率达到一致的时候，筛选出来的精子数量、活动力以及正常形态精子含量都会趋向一致，而当排除了母方卵巢反应不良、多囊卵巢综合征、等因素的影响下，IVF 的受精率及妊娠率就有可能不会呈现出显著差异[21]．。牦牛精子浓度对其受精后的卵裂率和胚胎发育有显著影响, 受精液中牦牛精子浓度为 2 × 106个/ mL 时, 卵裂率(67.3%)和囊胚率(31.3%)高[17]。获能后的精子进行顶体反应过程中释放酶类,溶解卵丘间基质,解开细胞间的缝管连接,使卵丘细胞离散,在卵丘细胞间有的精子未开始进行顶体反应,被卵丘