专题3植物的组织培养技术技巧.pptVIP

* 蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。 　　蛭石的化学式为（Mg，Ca）0.7（Mg，Fe，Al）6.0[（Al，Si）8.0]（OH4.8H2O）。 * 幼苗的移栽和栽培 无菌条件如何保证？ 需要保证无菌条件步骤 关键操作 培养基及实验器材的灭菌 高压蒸汽灭菌 灭菌干燥后直接拿到无菌操作台中 外植体的消毒 酒精、升汞、无菌水彻底清洗 接种的 无菌操作 始终在酒精灯旁进行 每次使用器械后，都需要浸泡在95%的酒精中 每次使用器械前，都需要用火焰灼烧灭菌 操作过程中避免双手从培养皿上方移动 每瓶内接种材料不宜过多 培养箱中的培养 观察时不打开封口膜 手持锥形瓶锥形瓶观察时正握 发现染菌外植体，及时转瓶，打开封口膜前先高压蒸汽灭菌 三、课题延伸 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季 总结植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 课题2 月季的花药培养 知识回顾 单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 被子植物的花的结构： 花的作用 被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分 二、被子植物花粉粒的形成 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉粒 1、雄蕊的结构 雄蕊： 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞 2、被子植物的花粉发育 ①经历时期： 小孢子四分体时期、单核期、双核期 ②花粉粒的形成 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 减数分裂 四分体时期 （进入单核期） 有丝 分裂 单核靠边期(小孢子) 单核居中期(小孢子) 小孢子 （单核花粉粒） 精子 精子 有丝 分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 生殖细胞 营养细胞 双核期 两个精子和一个营养核的基因型相同 三、产生花粉植株的两种途径 形成原因：主要取决于培养基中的激素的种类及其浓度的配比 胚状体 体细胞胚 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. （一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 四、影响花药培养的主要因素 实验操作 材料选取 材料的 消毒 接种和 培养 （一）材料的选取 ②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ①最常用的方法有醋酸洋红法 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核居中期与靠边期之间 从花蕾看：完全未开放的 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药在卡诺氏固定液中处理20min→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） （二）材料的消毒 花蕾 （_______） 清洗 吸干水分 消毒2～4min 冲洗3～5次 浸泡约30s （______） （__________） （____________） （_______） 70%酒精 无菌吸水纸 无菌水 无菌水 1%氯化汞溶液 1%次氯酸钙溶液 饱和漂白粉溶液 1%氯化汞溶液 说明：用于培养的花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 （三）接种和培养 1 消毒后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 3 通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。 2 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 无菌条件 不损伤花药 去除花丝 7-10个 25℃