本科显微镜实验概览.pptVIP

* 光学显微镜 细 胞 生 物 学 王 懿 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。 主要内容 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 2.显微镜的光轴调节 3.几种显微镜的介绍 5.口腔上皮细胞的观察 4.使用显微镜的注意事项 显微镜 1 2 3 4 5 6 7 8 开关 光亮度调节旋钮 1.1 显微镜的照明 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 显微镜的照明按其照明光束的形式，可分为“透 射式照明”和“落射式照明”两大类。透射式照明适用 于透明或半透明的被检物体，绝大多数生物显微镜属于此类照明法；落射式照明则适用于非透明的被检物体，因光源来自上方，故又称“反射式照明”。 1.2 聚光器 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 聚光器使来自光源的光线放大，并聚成光束透过样品射入物镜，聚光器由聚光镜和孔径光阑两部分组成。有时制造商会在聚光器的下方加上一个蓝色滤光片。 聚光镜 孔径光阑 滤色片 光轴中心调节螺杆 1.3 物 镜 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 因为所观察的物体表面相距较近，通常也叫接物镜。显微镜的质量主要取决于物镜，因此物镜是显微镜各组件中最为重要的光学部件。 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 根据物镜前透镜与盖玻片之间的介质不同，将其分为： 干燥系物镜：物镜与盖玻片之间以空气为介质。 水浸系物镜：物镜与盖玻片之间以水为介质。 油浸系物镜：也叫油镜，物镜与盖玻片之间通常以香柏 油为介质， 此类物镜的外表面常标有“oil” 字样。 注：油镜在用完之后须立即擦拭，否则容易污染物镜， 影响观察 1.3 物镜 1 2 3 4 5 1.3 物 镜 1、平场物镜 2、放大倍数 3、机械筒长无限大，盖片有无皆可 4、油浸系物镜 5、数值孔径 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 数值孔径是显微镜极为重要的参量，大小通常都直接标刻在显微镜的物镜表面，它的大小将直接决定显微镜的光学能力。 计算方法： 数值孔径（numerical aperture，NA）：也叫 “镜口率”或“开口率”，简称N.A.值。 μ :孔径角 η:介质折射率 N.A. η×sin（μ/2） 1.4数值孔径 N.A. η×sin（μ/2） η:介质折射率 μ:孔径角 10倍 40倍 100倍 μ μ μ 由10—100 N.A.逐渐增大 1.4数值孔径 在孔径角无法改变时，增大介质折射率可增大N.A. 分辨率：分辨物体两点最短距离的能力，R值越小分辨能力越大。 计算方法： 1.光学显微镜的主要部件及其数值参数 1.5 分辨率 提高方法： R ：最小分辨距离 λ ：光线的波长 N.A.：物镜的数值孔径 R 0.61λ/N.A. B：用镜油做介质，增大N.A. A：在光源处加上蓝色或蓝紫色滤片，减小波长 人眼：0.2mm 显微镜：0.2μm 电子显微镜：0.2nm 1.6 目镜 1. 光学显微镜的基本结构和主要部件 目镜（Eyepiece）：其作用是把物镜放大的实像 （中间像）再放大一次，并把物像映入观察者的眼中， 实质上目镜就是一个放大镜。 因为显微镜的分辨能力是由物镜的数值孔径所决 定的，目镜只是起放大作用。因此，尽管目镜可将所 观察影像再次放大，但它仍无法看出物镜不能分辨出 的结构。 2. 显微镜的光轴调节 在显微镜的光路系统中，光源、聚光器、物镜和目镜的光轴必须处在同一直线上，不然很难达到最佳的观测效果。 光路系统中物镜和目镜的位置固定无须调整，因此，光路的合轴实为聚光器和光源灯的调中 聚光器升降旋钮 视场光阑 光轴中心调节螺杆 2. 显微镜的光轴调节 1 转动聚光器升降旋钮使聚光器升至顶点位置，将载物台也升到顶点 2 打开电源开关。 3 向右旋转镜座上的视场光阑，在视野中可见边缘模糊的视场光阑图象 。 2. 显微镜的光轴调节 5 微降聚光器，至视野光阑的图象清晰聚焦为止。 （6）用聚光器的两个调中螺杆推动聚光器，使缩小的视场光阑图像调至视场中央。 （7）开放视场光阑，使多边形的周边与视场边缘相接。若不相接可反复调试几次。 （8）将聚光器恢复到最高位置。 5 6 7 3. 几种显微镜的介绍 明视野显微镜（brightfield microscope，BF）：也 叫明视场显微镜。这类显微镜在日常工作中的使用率 最高。 明视野显微镜的主要特征是以标本的颜色及投射 率为基础，标本通常需要染色才便于观察，当然缩小 光阑或上下调节聚光器（减小光亮度）也可达到观测 的目的。 4.1明视野显微镜 根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察 标本的显微镜。 不让直射光线进入物镜的镜头，而是先让直射光线经过暗