I第二章核酸化学解析.ppt

* 1950年 * 1962 年，WilkinsWilkins、WatsonWatson和CrickCrick共获诺贝尔化学奖。 * ● 核酸分离纯化的一般原则： 1.去除蛋白质和其他杂质； 2.保持天然状态。 ●核酸分离纯化的一般步骤： 第一步，破碎细胞。 第二步，去除蛋白质和其他杂质。 第三步，去除其他杂志核酸。 最后得到纯化的核酸。 1. DNA提取的基本步骤： I.材料准备 II.破碎细胞或包膜－内容物释放 III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质 ? V.核酸溶解在适量缓冲液或水中 一、 核酸分离提取： DNA的分离纯化 CTAB法： 1. 用液氮冻融，然后破碎细胞的同时，用含有CTAB的提取缓冲液使DNA与蛋白质解联。 2. 蛋白酶K消化以使蛋白质裂解。 3. 通过缓冲液饱和的苯酚抽提以除去蛋白，或利用氯仿-异戊醇处理除去蛋白。 4. 加入一定量的NaAC或LiCl, 用70%乙醇沉淀DNA。 5. 利用琼脂糖凝胶电泳进行进一步分离和鉴定。 SDS法：1. CTABSDS 2. 主要靠饱和苯酚抽提。 　CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium br