第2章工具酶分解.pptVIP

注意衔接体经过去磷酸化处理 HphI 一种IIs酶 * 这种方法对序列有一定要求：例如在12个核苷酸序列中没有G/C或A/T (T4连接酶处理同源区的两条链时，切掉的序列是互补的，这样留下来的序列也刚好互补，形成粘末端） 和T4连接酶一起加入了dGTP * 没有和T4连接酶一起加入了dGTP，这样必须控制合适的反应时间（半小时），然后加入某种脱氧核苷酸终止反应。 这种方法对连接点的序列没有要求。 * 其它特异性的限制酶 Omega核酸酶（I-SceI） 由酿酒酵母线粒体rRNA基因中的内含子编码，用于rRNA的剪切 5’-TAGGGATAA↓CAGGGTAAT-3’ ↑TATT I-PpoI：来自于多头绒胞菌Physarum polycephalum 基因内含子 5’- CTCTCTTAA↓GGTAGC -3’ ↑AATT 第二节 DNA 连接酶及连接方法  2.1 DNA连接酶连接DNA分子的机理 2.2 体外连接DNA的反应条件 2.3 连接方法 2.4 无需连接酶的连接方法 研究者发现细胞中线状的DNA分子经常能够自动环化起来，形成稳定的环状结构。而在体外，线状的DNA分子虽然也能够自动环化起来，如果没