PCR-RFLP计算机模拟计算解析.ppt

PCR-RFLP 基因分型方法 关于序列查找、引物设计和酶切位点分析 引入酶切位点引物设计 为什么要引入酶切位点？ 突变位点没有内切酶或者合适的内切酶 通过人为的在引物上改变一个碱基从而使之与突变位点的碱基构成新的酶切位点 引入酶切位点引物设计 tctcaacaaaaTcaaaactgtaag 突变位点，找不到合适的内切酶 tctcaacaGaaTcaaaactgtaag Hinf I 可以使用PCR-RFLP的方法基因分型 引入酶切位点引物设计 基本原则： 人为改变原序列上的一个碱基从而与突变位点的碱基构成新的合适的酶切位点 具体要求： 内切酶的选择：便宜、条件稳定和常用。 引物的位置：引物3’端的最后一个碱基一定不能超过突变位点 改变酶切位点的位置：尽量远离突变位点，最好不要紧邻突变位点，一般相隔2-3个碱基 引物的长度：在保证引物质量的前提下，尽可能的加长引物的长度。最好不要小于20bp 如何预知我的SNP的功能意义 如何预知我的SNP的功能意义 如何预知我的SNP的功能意义 结构域 名称 起止氨基酸编号 该结构域的氨基酸长度 如何预知我的SNP的功能意义 多态性 包括SNPs 定点诱变研究 氨基酸的改变 是否有功能意义 基因序列查找 更多序列查找方法、查找途径、数据库信息和序列比对 请参考 引物设计 引物设计 引物一般原则 基本原则： 1. 引物要跟模板紧密结合， 2