第7章蛋白质分离纯化与表征分解.ppt

蛋白质分离纯化是利用其特性的差异 分子的大小和形状 酸碱性质 溶解度 吸附性质 对配体分子的特异生物学亲和力 蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性 碱/酸越大——pI 越大 pI通常在 6.0 左右 蛋白质的分子量 一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿＝1×C12绝对质量/12 ≈1.66×10-27千克 测定蛋白质相对分子质量的原理和方法 （一） 根据化学组成测定最低相对分子质量 （二） 沉降分析法测定相对分子质量 （三） 凝胶过滤法测定相对分子质量 （四） SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 （一）根据化学组成测定最小分子量 （三）凝胶过滤法测定相对分子质量 葡聚糖凝胶过滤法 （四）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 （最常用） SDS（十二烷基硫酸钠）一种阴离子去污剂，作为变性剂破坏分子内的疏水作用和氢键。 目前测定亚基分子量的最好办法。 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （二）蛋白质的沉淀 Pr从胶体溶液中析出 任何破坏稳定蛋白质溶液的因素都可能使蛋白质沉淀 I 可逆沉淀 温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷 Pr结构和性质没有变化 适当条件下可重新溶解 ——非变性沉淀 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 不可逆沉淀 强烈沉淀条件 破坏Pr胶体溶液稳定性 也破坏Pr结构和性质 沉淀不能再重新溶解 ——变