Antibody2012-12-3课件.pptVIP

抗体及其应用研究 抗体的三维结构 二、IgC区的功能 　　１、激活补体 　　 Terminal pathway ? Membrane Attack Complex ２、结合Fc段受体 　　　 ①免疫调理作用（opsonization） 　　　　②抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC） ③介导Ⅰ型超敏反应 　　 　　　 抗体的研制及鉴定 一、多克隆抗体 二、单克隆抗体 杂交瘤细胞的单克隆化培养： 单克隆抗体的一般性特性鉴定 1、类型鉴定 2、杂交瘤细胞的染色体数目 3、效价 4、识别的抗原表位 1、类型鉴定（快速定性试纸法） 3、效价 免疫荧光法及ELISA 等 4、识别的抗原表位 免疫荧光法、竞争抑制法等 三、基因工程抗体 Types of antibodies 抗体在疾病治疗中的应用 思 考 题 1、试述T 淋巴细胞的活化机制? 2、试述NK细胞对靶细胞的杀伤途径及分子机制? 3、试述肿瘤免疫治疗的方法有哪些？简述其原理？ 4、试述肿瘤干细胞的靶向治疗手段有哪些？简述其原理？ 5、举例阐述肿瘤微环境因素对肿瘤发生、发展、诊断及预后的影响? 6、试述异常表达的共刺激分子在自身免疫病发生机制中可能的 作用？如何通过共刺激分子对自身免疫疾病进行辅助诊断和治疗？ 7、试述维持造血干细胞增殖及分化的方法？ 8、举例阐述抗体（多抗、单抗或基因工程抗体）在基础研究或临床疾病诊断或治疗中的应用？ 1个细胞/100微升/孔 (理论上) 多次单细胞化培养及筛选 以确保为单克隆抗体 鼠源性单抗的生产方法 1、体外法： 收获杂交瘤细胞的培养上清 CO2培养箱培养 滚瓶培养系统 2：体内法： 诱生腹水法 程序： A:Pristane致敏; B:腹腔注射杂交瘤 细胞500-1000万/只; C:7-10d后收获腹水； ※:此种方法生产的抗体 多用于体外分析研究 之用 2、杂交瘤细胞的染色体数目鉴定 100条 16.5% 70.0% 46.5% 91.2% 93.0% 93.9% 88.4% 93.6% 95.6% 5.1% 3.5% 0.9% 三、基因工程抗体（genetically engineering antibody） 　　利用DNA重组技术在基因水平对Ig分子进行切割、 　　 拼接或修饰，然后导入受体细胞表达而产生的新型 　　 抗体（第三代抗体）。 Ig fragments (Fab, Fv, single chain Fv (scFv) ), bivalent scFv(diabody),triabody and tetrabody 例1：抗人CD28人-鼠嵌合抗体的制备工艺流程 亲本杂交瘤细胞 cDNA VH，VL gene 构建表达体 总RNA RT-PCR 以cDNA为模板，ScFvVH和VL、特异性引物，PCR 转染CHO ,筛选及表达 (Gly4Ser)3 PCR、双 酶 切、基 因 测 序 例2：单链抗体的研制流程 例3：人源抗体分子的设计 基因工程抗体的生产： 方法1：滚瓶培养系统 方法2：小型波浪式反应器 （wave reactor） 方法3：大型波浪式反应器：最大可达1000L 全球最大的生物制药公司Amgen公司生产Enbrel: 10?12,500L，产能约500kg/年 全球抗体药物最多的Genentech公司生产Herceptin和Xolair: 8?12,500L，产能约500-1000kg/年 方法4：大型不锈钢细胞培养反应器 细胞培养反应器: 12?15000L 抗体纯化Protein A柱: 直径2m 鼠源抗体的缺点： 1、血浆半寿期短（30-40h），在人体中易被清除; 2、人体免疫细胞Fc受体结合鼠IgG的Fc段的能力很差， 不能有效引发抗体依赖性介导的细胞毒效应（ADCC） 和IgG、IgM所致的补体活化作用； 3、 反复使用鼠源单抗会产生人抗鼠抗体（HAMA）， HAMA反应可以有效快速地破坏鼠源单抗，从而削弱 治疗效应； 4、易引发过敏与免疫复合物反应。 不同类型的IgG在人体血清中的