卵磷脂的制备资材方案.pptVIP

卵磷脂的生产 生物技术1211 徐焕 目录 概述 实训原理 实训试剂与仪器 实训步骤 卵磷脂的检测 注意事项 一、概述 卵磷脂与蛋白质、维生素并称为三大营养素。卵磷脂是磷脂的一种，是生物体组织细胞的重要组成成分，是构成生物体细胞膜的重要成分之一，在膜结构中起着骨架的作用，广泛存在于动植物体内。目前，卵磷脂产品主要是从大豆油、菜籽油等植物的水化油角，动物的肝、脑、脾、心脏等组织和蛋黄中提取得到，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右 。从磷脂含量上可均分为粗蛋黄卵磷脂（磷脂含量约30%，一般用作保健品）和精制卵磷脂（磷脂含量≥90%，主要用于制造静脉营养药脂肪乳）。 二、实训原理 卵磷脂可在植物的水化油或动物的脑和蛋黄中提取 ,尤以蛋黄中含量最高； 卵磷脂溶于乙醇，不溶于丙酮，因此可以利用乙醇从蛋黄中提取粗卵磷脂，而甘油三脂、甾纯溶于丙酮，所以可用丙酮将卵磷脂从粗卵磷脂中沉淀出来，得到精卵磷脂。因为卵磷脂能与锌等二价重金属离子反应生成络合物，因此可利用金属盐将卵磷脂从溶液中提取出来，后再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，从而提高卵磷脂的纯度。（有机溶剂提取法） 三、实训试剂与仪器 熟鸡蛋黄； 试剂：无水乙醇、95% 乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、甲醇、钼酸铵、硅胶 G 、羧甲基纤维素Na （ 以上试剂均为分析纯）； 仪器：电热恒温水浴、强力电动搅拌器、旋转蒸发器、真空干燥箱、薄层色谱扫描仪、冻干机。 四、实训步骤 （一）蛋黄卵磷脂的粗提 首先将蛋黄研磨，加入10ml的95%乙醇，混合搅拌研磨。 再加入10ml的95%乙醇搅拌研磨； 减压过滤（盖满漏斗·）。 布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，加入10ml的95%乙醇研磨。 减压过滤，合并两次滤液， 把澄清滤液移入蒸发皿内蒸发，得到黄色油状物，冷却。 用5ml氯仿搅拌溶解，加15ml丙酮，搅拌析出晶体 五、卵磷脂的检测 薄层层析法 将卵磷脂样品与对照品分别配成2%氯仿溶液，分别用硅胶G板和硅胶CMC板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：水（65：25：4），层析完毕后，取出薄板，干燥，碘蒸气显色。 紫外吸收光谱测定 将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1%乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90~400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。 薄层层析 薄层层析（TLC）是一种微量而快速的层析方法。其层析是在吸附剂（固相支持物）均匀涂布的的薄层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层剂中，在密闭的层析缸中展层。 卵磷脂成分检测 卵磷脂水解成四种产物：脂肪酸、甘油、胆碱、磷酸。 第一步先把卵磷脂水解：取一支干燥大试管，加入提取的1/3的卵磷脂。加入5ml20%NaOH溶液，放入沸水浴中加热10min，并用玻璃棒搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在布氏漏斗中进行抽滤，抽滤纸上有白色沉淀。 脂肪酸的检查：取滤纸上沉淀（滤饼）少许，加1滴20%NaOH溶液与5ml水，用玻璃棒搅拌使其溶解。过滤得澄清液，用硝酸酸化。加入两滴10%醋酸铅。溶液变混。 胆碱的检测：取水解液1ml，滴加H2SO4使其酸化，加入1滴克劳特试剂，有砖红色沉淀生成。 甘油的检查：加1%CuSO4溶液1ml，加2滴20%NaOH溶液，振荡。加1ml水解液，溶液颜色变深 注：克劳特试剂 A液：0.85g次硝酸铋倒入10ml冰醋酸中加水40ml B液：40%KI溶液20ml 取AB溶液各5ml，加20ml冰醋酸，加入60ml水 由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以分离，并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。 卵磷脂的薄层层析 1、调浆：称取硅胶-G 4.5g →烧杯→ 12ml 0. 2%羧甲基纤维素钠溶液→用玻璃棒调匀搅拌为浆状液。 2、涂布：取洁净、干燥玻璃板一块→下衬一张白纸→在桌面上放平→用烧杯将浆状物均匀倒在玻璃板上，从一端开始，保持均匀一致，涂布面积1 ～4/5 。 3、干燥：在室温下凉干2分钟→60℃干燥箱烘30分钟。 4、活化：将干燥箱升温至120 ℃ ，活化30分钟后，关闭电源，当玻璃板面温度降至不烫手时取出。 5、点样：样点距玻璃板一端下缘1cm ，相互间隔1～1.2 cm ；每位点重复点五次，每次用冷风吹干后再点，每次点样直径不超过2mm 。 6、展层：在层析缸中加入展层剂0.5cm深，加盖平衡30分钟，将点样端浸入，密闭展层10-30min。后取出薄层板，标出展层剂前沿位置，用电吹