细胞培养总论幻灯片.pptVIP

缺点： 现人工模拟体内环境的技术已经很高，但人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同。当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中久了，必然发生变化。 1.与体内主要不同 相对孤立、相对单一， 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2.主要表现 失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显， 细胞趋向单一化 提示：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 1、成纤维细胞型 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织如： 　　　真正的成纤维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞， 　　　血管内皮 形态：胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2-3个长短不等的突起，中有卵圆形核 生长特点：排列成放射状，漩涡状 细胞-细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起 2、上皮型细胞 名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同 来源：来源于外胚层、内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物，消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆 　　　形核 生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状 　　　生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动 4、多型细胞型 有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 悬浮型 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 来源：自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞癌肿细胞 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)， 　　　易于收获，可获得稳定状态 缺点：观察不方便，很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细 　　　胞) 培养细胞的增殖特点 培养细胞的生长过程 细胞系的生长过程 （一）、原代培养：组织细胞从体内取出后在体外生长环境中继续培养。一般为1-4周。 原代培养期主要有以下生物学特点： 1.黏附、组织分散制成细胞悬液，接种培养器皿后细胞黏附（贴壁），不同细胞贴壁能力不同，巨噬细胞、成纤维细胞黏附力强，几分钟→数十分钟已贴壁。神经细胞等则弱。培养液中离子成份及其浓度能影响细胞贴壁。 2.铺展、对贴壁细胞来说，只有铺展到合适程度DNA合成才开始进行。此种细胞在相差显微镜下观察；细胞 轮廓清楚、核隐约可见、常见核仁，细胞周围有光晕。细胞生长不良；细胞暗、轮廓明显、胞质中出现小颗粒和泡状结构。 培养细胞的生长的条件 细胞的营养需要 基本营养物质 促生长因子等物质 细胞的生存环境 温度 气相及pH 渗透压 无污染及无毒 （一）准备室 准备工作的好坏直接影响细胞培养的结果。有条件可以将其分成几间：清洗、干燥、包装在一室，消毒、纯水制备在另一室。不同用途的培养皿应分开清洗，消毒。 （二）缓冲室 一般应3—5㎡，紫外灯距离地面≤2·5m。工作人员可在此更衣。室内可放恒温箱、水浴箱、离心机、冰箱等物。 （三）培养室 　　　是专用于细胞培养和各种无菌操作的地方，应清洁、干燥、不通风、光线好。墙、地应光滑，易清洁。 按国家标准：百粒级实验室≥ 0.5微米尘埃粒子数应＜3.5个／L，≥5.0微米尘埃粒子数应≤0个／L。万粒级标准≥ 0.5微米尘埃粒子数应≤350个／L，≥5.0的应≤2个／L。　 三、 培养箱 选择灵敏度高、温控精确，能恒定一定量CO2的培养箱。一般为5%CO2 95%空气，温度37±0.5度，箱内保持一定湿度，一般用无菌蒸馏水。使用培养并时应拧松瓶子盖。保持培养容器与箱内气体处于交通状态。 注意：对培养箱要定期消毒。培养液的pH值一般为⒎2～⒎4。 还有三气（CO2、N2、O2）培养箱，适用于细胞缺氧或高氧方面的研究。 七、低温贮存装置：液氮罐（运输、贮存用）。液氮温度-196℃ 八、水的纯化装置：石英玻璃蒸馏器、进口纯水仪。可制备出供培养用液的优质水。 九、PH计：台式、笔式，配制培养用液时调节pH值。 十、其它：天平、高压蒸汽消毒锅、干燥箱、过滤除菌装置、移液器，各式各样培养皿、培养瓶、冻存管、离心管，各式吸头、吸管等。 细胞培养的实验用品 细胞培养瓶 25平方厘米 75平方厘米 150平方厘米 细胞培养板 ?6孔 12孔 24孔 48孔 96孔 细胞培养皿 ?35mm ?60mm? 100mm? 冻存管 1.2ml 2ml， 5ml 离心管 ?15ml ?50ml 细胞刮 滤 器 清洁液的配制 第四章 细胞培养的基本技术 培养室内的无菌操作 培养前准备 培养室和超净台的消毒 洗手和着装 无菌培养操作 细胞培养失败