色谱法_08HPLC的及应用教案分析.ppt

HPLC的介绍及应用 HPLC用于分离： 高沸点化合物； 难挥发及热不稳定的化合物； 离子型化合物及高聚物等。 HPLC结构: 输液系统; 进样系统; 分离系统; 检测系统; 梯度洗脱装置; 数据处理系统 输液系统 流动相贮存器: 高压泵: 能提供150－450kg/cm2的压强；流速稳定，流量可以调节； 梯度淋洗装置 : 可以将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程序连续改变组成，以达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。它的作用与气相色谱中的程序升温装置类似。 进样系统 采用六通阀进样 分离部分 检测系统 紫外检测器:(常用) 根据朗伯—比尔定律，样品浓度越大，产生的信号越大. 灵敏度高，线性范围广，对温度和流速不敏感，适于梯度洗脱。 示差折光检测器 洗脱液组成的变化会使折射率变化很大，因此，这种检测器也不适用于梯度洗脱。 荧光检测器 用于检测物质本身具有荧光或无荧光物质衍生成荧光体 光电二极管阵列吸光度检测器 是同时可以得到吸光度、波长、时间——这样三维情报的检测器 一、HPLC的分离方式 1、吸附色谱 2、分配色谱 3、离子交换色谱 4、凝胶色谱 1、吸附色谱 根据填充剂吸附活性点对样品的吸收系数不同而分离 充填剂：硅胶 2、分配色谱 根据固定相与流动相的极性不同而分为