第2章DNA重组(限制性内切酶与DNA片段化)概论.pptVIP

第二章 DNA重组 1.天然DNA的种类 染色体DNA 病毒和噬菌体DNA 质粒DNA 线粒体和叶绿体DNA 天然DNA的提取 （自学） 2.限制性内切酶和DNA片段化 核酸内切酶和DNA连接酶的发现与应用，才真正使DNA分子的体外切割和连接成为可能。这两种酶是基因工程赖以创立的重要的酶学基础。 限制性内切酶 一类能识别dsDNA分子内部的特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸酶 来源：主要从原核生物中分离纯化而来 II型核酸内切酶：2300种以上，可识别230种不同的DNA序列（1994年，美国，分子生物学百科全书） 这种大自然赋予基因工程学家的了不起的礼物是如何发现的呢 2.1 寄主控制的限制与修饰现象 大多数的细菌对于噬菌体的感染都存在这一些功能性障碍。 如：目前尚未发现有任何一种既可感染假单胞菌又可感染大肠杆菌的噬菌体，且非寄主细菌的RNA聚合酶不能够识别“外源”噬菌体的启动子，即使噬菌体的吸附和转录能进行，也仍然存在这另一种功能障碍——即为寄主控制的限制和修饰现象 限制——修饰现象 产生这种现象的原因何在 限制——修饰体系 在限制修饰系统中限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制； 而生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用：在碱基中特定的位置上