实验二聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定免疫球蛋白详解.pptVIP

（4）“纹理”现象由于样品中的不溶颗粒引起的。 （5）偏斜现象 电极放置不平行引起或加样位置偏斜而引起 （6）带太宽 加样量太多或加样孔泄漏引起 实验三 目的蛋白Western Blotting检测 一、目的 1、了解Western Blotting的原理及其意义，掌握Western Blotting的操作方法； 2、应用Western Blotting技术鉴定经SDS分离后的目标蛋白。 二、原理 Western Blotting简称蛋白质印迹法。蛋白质样品经SDS电泳后，凝胶所含的样品蛋白质区带通过电泳方法转移、固定到载体（如硝酸纤维素膜）上，固相载体以非共价键的形式与蛋白质结合，从而固定蛋白质；以膜上的蛋白或多肽为抗原，与相应的第一抗体起免疫反应，再和酶标记的第二抗体反应，用适当的溶液漂洗去未结合抗体后，置含底物的溶液中温育，即可检测出样品中的特异蛋白质组分。 三、试剂与器材 1、膜转移缓冲液 2、TBST缓冲液 3、封闭液 含有5%脱脂奶粉的TBST液。 4、DAB显色 实验器材 半干转移槽 PVDF (聚偏氟乙烯)膜 两张厚的滤纸 刀片 塑料盒 四、操作步骤 1、当表达产物的SDS电泳结束时，带上手套，剥胶，切6-8张滤纸和一张PVDF膜，它们的大小与凝胶完全吻合。 2、在一塑料盒里加入少量转膜液，将滤纸与胶浸泡于其中5-10min；PVDF膜浸入甲醇中