丙酮酸激酶在埃博霉素合成中的应用解析.doc

第一章 绪论 1.1埃博霉素介绍 1.1.1简介 随着逐年增加，新颖抗肿瘤药物迫在眉睫。埃博霉素类药物具有微管稳定作用，其选择性高、活性强、毒性较低，有望取代紫杉醇成为新一代抗肿瘤药物，具有巨大的市场前景。(epothilone)是一类纤维堆囊菌Sorangium cellulosum)产生具有抗肿瘤活性的化合物与传统的抗癌药物紫杉醇能够更好抑制肿瘤细胞，。食品药品监督管理局（Food and Drug Administration） ? 埃博霉素的活性示意图? ? ? 1.1.2应用 埃博霉素的抗肿瘤作用机理与紫杉醇相似，即抑制微管解聚。埃博霉素在p-糖蛋白表达型的多药耐药性肿瘤细胞系中显示很强的抗肿瘤活性，这种肿瘤细胞系紫杉醇是杀不死的，加之埃博霉素比紫杉醇有更好的水溶性，且毒副作用很小，被公认为21世纪最有效的抗癌药物。? 由美国施贵宝公司开发的埃博霉素B内酰胺衍生物Ixabepilone（通用名为伊沙匹隆），于2007年10月16日由食品药品监督管理局（Food and Drug Administration）(PK)是糖酵解中的三大关键酶之一。在哺乳细胞株中，丙酮酸激酶有4种同工酶并呈组织特异性，分别为L型、R型、M1型和M2型，通常均以酶的活性四聚体形式存在，根据组织不同的代谢功能，它们具有显著的不同调控机制与动力学特性，其中L型主要存在于肝脏和正常肾脏的近曲小管；R型存在于红细胞；M1型主要存在于骨骼肌、心脏和脑；M2型主要表达于肺正常肾脏的远曲小管、胚胎和未分化或增生的组织。其中PKL 和PKR 由基因L 编码，通过不同的组织特异性启动子而分别表达于肝细胞和红细胞中。PKM1、PKM2 由M 基因编码，在转录过程中由前体mRNA 经不同选择性剪切的产物 ，PKM1 的外显子为9，主要存在成熟组织如脑组织与骨骼肌，与PEP 底物的亲和力最高，不能被磷酸化和被别构化调控；PKM2 的外显子为10，其负责二聚体转化成四聚体的C 端56 个氨基酸与PKM1存在差别，主要存在一些分化组织、具有核酸合成特性的细胞中如胚胎细胞。但随着胚胎形成，PKM2 被不同组织的同工酶替代，有趣是，肿瘤形成过程，其它同工酶消失，PKM2 酶则高度表达，这给癌症治疗奠定新的生物基础。 研究表明，当恶性肿瘤发生时，PK的组织特异性同工酶(L型、R型、M1型PK等)表达减少，在癌基因编码的激酶作用下，M2一PK可在肿瘤细胞中呈过度表达并且其丝氨酸（Serine，Ser）和酪氨酸（Tyrosine，Tyr）位点均发生磷酸化，使得原先具有高度活性的四聚体解离为无活性的二聚体形式，并占据主导地位，即TU M2一PKt”。 1.2.2作用 丙酮酸激酶M2一PK以四聚体形式存在时活性高，与底物磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)亲和力强，而以二聚体形式存在时则与之相反。TU M2一PK与PEP的亲和力很低，导致磷酸烯醇类物质的堆积，这有利于肿瘤细胞不是糖酵解供能而转向核酸合成的方向进行，此相对于糖酵解的过程，可称之为谷氨酸酵解过程，以保证细胞中的能量供给。 细胞增殖是一个耗能过程，若细胞无限增殖，细胞会因能量供应不上而死亡。PK在阻止细胞死亡的调节中发挥着重大作用。PK催化PEP是其磷酸转移到二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate，ADP)或二磷酸鸟苷(Guanosine diphosphate，GDP)上，同时产生丙酮酸、三磷酸腺苷(ArI’P)或三磷酸鸟苷(Guanosine triphosphate，GTP)，糖酵解过程中在PK的作用下导致能量的净生成。因此丙酮酸激酶可调控ATP：ADP和GTP：GDP的比率以及一磷酸腺苷、腺苷酸激酶、磷酸果糖激酶的水平。一磷酸腺苷水平的提高可以减少辅酶A、三磷酸鸟苷以及三磷酸胞苷合成，从而抑制DNA的合成和细胞增生。M2一PK通过这种机制来调控细胞增生以及能量的转换及供给。在肿瘤细胞中，M2一PK二聚体和四聚体的比例受肿瘤蛋白和能量代谢介质的调节而产生变化，以达到适应肿瘤代谢的需要。研究表明，四聚体型与二聚体型M2一PK的比率由ATP、1，6一二磷酸果糖、丝氨酸（Serine，Ser）以及不同的癌蛋白(pp60v一8rc、HPV一16 E7)之间的相互作用来调控。在有足够氧气供应的实体瘤中，谷氨酸酵解提供大量的丙酮酸。这些谷氨酸酵解和糖酵解中产生的丙酮酸用来合成乳酸、谷氨酸和脂肪酸，从而释放出在糖酵解过程中甘油醛3一磷酸脱氢酶作用下产生的氢，进而保证肿瘤细胞中能量的供给。可见，TU M2一PK在肿瘤新陈代谢中是发挥及其重要的作用。 1.3代谢调控 1.3.1简介 在工业发酵领域,发酵微生物学家研究探索发酵微生物的调控机制,通过控制器代谢调控使其高产具有商业价值的产物(如:某种代谢物、酶)，