SILAC技术解析.ppt

蛋白质组体内标记技术─SILAC技术 SILAC发展历史 原理 特点 应用 参考文献 Thank you! * * 细胞培养稳定同位素标记技术（SILAC）是在细胞培养过程中，利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术，对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。 它不仅可以对蛋白质进行定性分析，还可通过质谱图上一对轻一重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平，实现对蛋白质的精确定量。 稳定核素标记技术的出现依赖于质谱技术的 发展及其在小分子化合物定量方面的应用。 ２０００年左右Ｃｈａｉｔ等以及随后的Ｌａｈｍ等首运用含有１３Ｃ和１５Ｎ的培养基标记微生物进行蛋白相对定量。 ２００２年，Ｏｎｇ实验室改进了Ｃｈｅｎ等提出的氨基酸核 素标记技术，建立了SILAC 法。在之后的发展，SILAC技术的适用对象逐步扩大，从最初的哺乳动物细胞标记发展到酵母细 胞、植物细胞、整体哺乳动物、组织样品、线虫等众多研究领域。近年来，SILAC 技术结合质谱、液质联用已经成为生物医学定量蛋白质的有效方法之一。 SILAC 即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，采用含有轻、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养，细胞传代若干代后，细胞内蛋白被同位素稳定标记，将蛋白质等量混合后进行分离和质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对