X3-1-1__DNA重组技术的基本工具汇总.ppt

* 1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 * 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 * 是指按照人们的意愿，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 又叫DNA重组技术或基因拼接技术。 生长激素、胰岛素 * 别 名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结 果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实 质 基因重组 什么是基因工程 一种定向改造生物的新技术 * 1.1 DNA重组技术的基本工具 * 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) * 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆 菌细胞内提取。 关键步骤二：抗虫基因与载体DNA连接。 关键步骤三：抗虫基因进入棉细胞。 基因的分子手术刀——限制性内切酶。 基因的分子缝合针——DNA连接酶。 基因的分子运输车——载体。 抗虫棉培育 * ①来源： ②功能： ③结果： 主要在微生物(原核生物)中分离纯化出来的 特异性——识别特定的核苷酸序列 （使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开） 产生黏性末端或平末端。 * 特定的切点相邻两个核 苷酸之间的磷酸二酯键。 切割的化学键 A P A P G P * T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A * 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 错位切 * SmaⅠ 平末端　　　平末端 平切 * 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口在中心轴线的两边（带有几个伸出的核苷酸，正好互补配对） 错位切 * CCC CCC GGG CCC GGG CCC GGG CCC GGG CCC 中心轴线 平末端 酶切位置（G与C之间切割） 什么叫平末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口都在中心轴线上（切开的两段DNA是平头的） 平切 * * * 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 * 2、基因工程的连接酶 “DNA连接酶”--“分子缝合针” 将两段DNA链连接 1．分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连 接酶和T4DNA连接酶两类 2．功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键。 ★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E·coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能 使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末 端之间的效率较低。 * DNA连接酶的种类 种类 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 作用 将双链DNA片段“缝合起来”，恢复被限制性内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 区别 只能连接 黏性末端 黏性末端和 平末端都能连接 * * E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， * 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较