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Vector NTI 载体（vector） ，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。 载体必备条件 ①含有复制起始位点，能够独立复制,在宿主细胞中能保存下来并能大量复制。 ②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。 ③有一定的标记基因，便于进行筛选。 三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。 pBR322是一个人工构建的重要质粒，有万能质粒之称。它是由pSF2124、pMB1及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。 p BR 322 Plasmid 研究者Bolivar和Rogigerus 实验编号 如何读懂质粒图谱 载体必备条件 ①含有复制起始位点，能够独立复制,在宿主细胞中能保存下来并能大量复制。 ②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。 ③有一定的标记基因，便于进行筛选。 ①Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） ②看多克隆位点（MCS） ③筛选标记 载体必备条件 ①含有复制起始位点，能够独立复制,在宿主细胞中能保存下来并能大量复制。 ②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。 ③有一定的标记基因，便于进行筛选。 ①Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） ②看多克隆位点（MCS） ③筛选标记 ④表达系统元件 pBR322质粒载体的构建过程可简单地概括如下： 1、由于pBR322质粒的亲本之一是pMB1质粒，故首先以pMB1为基础，引入Rldrd19质粒的Tn3易位子，得到13.3kb的pMB3质粒； 2、pMB3的分子量显然使得它不适合作为载体，所以要通过在EcoRI活性条件下的消化让它大部分的无用片段失去，留下来的小片段的DNA的黏性末端连接起来后就形成了pMB8质粒（2.6kb）； 3、此时，另外一种pSC101质粒在EcoRI活性条件下消化产生了含有tetr抗性的DNA片断，这个片断和pMB8整合在一起就形成了pMB9质粒（5.3kb）。此时pMB9为ampstetr表型； 4、pMB9已经初步具备载体的功能，为了让它更加完善，我们要让它具备amprtetr性能，即在pMB9上引入pSF2124的Tn3易位子，但Tn3可以来也可以走，为了留住它，我们切去了Tn3中表达转位酶的基因，形成了pBR313质粒。 此后我们兵分两路：一路把pBR313的PstI位点除去，使之成为ampstetr表型的pBR318质粒； 5、另一路把pBR313的EcoRII的位点切除，使之成为amprtets表形的pBR320质粒。 由此我们的到了两种功能互补的质粒，这样我们只要将他们杂交就可以得到一种接近全能的载体质粒了，这就是pBR322 。 pBR322 is a plasmid and was one of the first widely used E. coli cloning vectors. Created in 1977 in the laboratory of Herbert Boyer at the University of California, San Francisco, it was named after the postdoctoral researchers who constructed it. The p stands for plasmid, and BR for Bolivar and Rodriguez. pBR322 is 4361 base pairs [1] in length and harbors the origin of replication of plasmid pMB1, a close relative of the plasmid ColE1. pBR322 also contains the ampR gene, encoding the ampicillin resistance protein (source plasmid RSF2124) and the tetR gene, encoding the tetracycline resistance protein (source plasmid pSC101), and the rop gene, encoding a restrictor of plasmid copy number. The plasmid has unique restriction sites for more than forty restriction enzymes. 11 of these 40 sites lie within the tetR gene. There