水中细菌总数和大肠杆菌检测研究报告.ppt

* 水中细菌 总数与大肠菌群的测定 一 实验目的 1、掌握细菌总数的测定方法 2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法 3、巩固无菌操作技术 1.细菌总数测定原理 用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单位重量或体积（g或ml）内所含有的活细菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。 二 实验原理 2 大肠杆菌鉴定原理 大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否染肠道致病菌的可能。 样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。 细 菌 学 检 验 程 序 样品 细菌总数 大肠菌群 水样稀释或不稀释 水样稀释或不稀释 第一步------ 初步发酵试验 倾注平板培养 （乳糖发酵） 37 ℃ 24小时 37℃ 24小时 菌落计数 第二步------ 平板分离培养 （取平均数报告） （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检 第三步------- 乳糖复发酵试验 报告结果 三、实验器材 1、恒温培养箱（36℃±1℃ ）、恒温水浴锅（46℃±1℃ ） 、天平、灭菌培养皿、试管。 2、培养基及试剂： 乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板（EMB）、牛肉膏蛋白胨培养基 1.以1ml无菌吸管吸取样品1ml加入9ml 无菌生理盐水， 使样品（自来水、饮用水、饮料等）成 1：10 、1：100 、1：1000 等几个稀释度；样品（下水道水、牛奶）稀释度要适当高。 2.分别在无菌平皿内加入1：100、1：10、原样的样品各1ml，每个稀释度均做一个平板。 注意 ：先加浓度低的样品，再加浓度高的样品 3.将冷却45℃的营养琼脂倾注于平皿中，摇匀，置37 ℃培养24小时。 四、实验步骤-细菌总数测定 平皿分4部分点数（见图） 求同一稀释度的平均菌落数 如： A1数 + A2数 + A3 3 4、菌落计数： 1）平板菌落数的选择 2）稀释度的选择 3）菌落数的报告 菌落数＜100 按实有数报告 菌落数＞100 采用两位有效数，后面数值 四舍五入（也可用10的指数表示） 无法计数 无法计数报告 （ 注明水样的稀释倍数） 5. 菌落计数的报告： ★稀释度的选择：