1.1DNA重组技术的基本工具解析.pptVIP

三、基因的载体——“分子运输车” * 1.1 DNA重组技术的基本工具 角似鹿 鼻似狮 目似虎 唇似牛 爪似鹰 髭似马 鳞似鱼 身似蛇 抗虫棉 蓝色玫瑰 能生产胰岛素的大肠杆菌 转基因鼠 能发荧光的转基因猪 结合此图讨论如何让蛇长出鹿角呢？ 说出其步骤 及用到的工具。 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定切点的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外源的DNA切断，使之失效，达到保护自身的目的。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 （一）限制酶——“ 分子手术刀” 1 2 3 4 5 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 G A A T T C C T T A A G EcoRⅠ 中轴线 C C C G G G G G G C C C SmaⅠ 黏性末端　　　　 平末 端　　　平末端 黏性末端 　　　　 目的基因所在的DNA分子 SmaⅠ识别序列及切割的位点为CCC↓GGG EcoRⅠ识别序列及切割的位点G↓AATTC 请选择合适的限制酶切割目的基因 （二）DNA连接酶——“ 分子缝合针” 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 （二）DNA连接酶——“ 分子缝合针” E·coli连接酶只能将DNA片段的粘性末端之间连接起来，而不能把平末端之间的缝隙“缝合”起来。 T4DNA连接酶 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低。 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 4、对受体细胞无害 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 能复制并带着插入的目的基因一起复制 是切割和插入位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 实际操作的质粒一般都是人工改造过的 含鹿角基因的DNA分子 鹿角基因 质粒 重组质粒 材料： 蓝色纸条（代表鹰爪基因所在的DNA分子） 或粉色纸条（代表鹿角基因所在的DNA分子）、 黄色纸环（代表质粒）、 剪刀（代表限制酶）、透明胶条（代表DNA连接酶） 以小组为单位，选择合适的限制酶，切割含目的基因的DNA分子和质粒，制作重组质粒。 任务： 切割时选择合适的限制酶。两种酶的信息如下：HindⅢ 识别序列及切割的位点为A↓AGCTT EcoRⅠ 识别序列及切割的位点G↓AATTC 提示 1.下列关于限制酶的说法正确的是 A．限制酶广泛存在于各种生物中，但原核生物 中很少 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 *