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THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 262, No. 20, Issue of July 15, pp. 9902-9907 1987 ? 1987 by The American Society of Biological Chemists, Inc. Printed in USA 氧自由基对蛋白质的损伤和降解 Ⅱ 氨基酸修饰 （发表日期：1986.12.30） Kelvin J. A. Davies, Marta E. Delsignore S, and Sharon W. Lin From the Institute for Toxicology and the Department of Biochemistry, The University of Southern California, Los Angeles, California 90033 蛋白质的羟基自由基羟基与超氧阴离子自由基·OH + 02- (+02)相结合造成重大的结构改造。这种修饰的蛋白质可以发生自发性的断裂形成碎片或可以表现出在蛋白水解的易感性大幅增加。在目前的研究中，我们报告具有代表性的蛋白牛血清白蛋白（BSA）在初级结构的基础上的结构修饰。BSA所有氨基酸中都容易被·OH 和·OH + 02- (+02)修改，尽管色氨酸，酪氨酸，组氨酸和半胱氨酸特别敏感。在自由基/BSA的摩尔比（nmol自由基/ nmol BSA）为10时，我们观察到平均9-10%的氨基酸被的破坏；而在比率为100时，平均损失为45%。随之减少的色氨酸荧光为氨基酸损失提供了一个有用的指标，并呈现明显的·OH或与·OH + 02- (+02)剂量依赖性。在进行·OH处理后同时观察到了双酚二聚酪氨酸的线性产生。相反，·OH + 02- (+02)仅仅导致有限的二聚酪氨酸生产速度，且其很早进入平台期。对各种化学清除剂（叔丁醇的研究，异丙醇，甘露醇，尿酸盐）和气体（N20，02，N2，空气）的研究表明，·OH是造成所有氨基酸修饰的原始基团，但02- 和 O2可以进一步改造·OH的反应产物。因此，02-/02可以增强许多氨基酸（如色氨酸）·OH依赖的破坏，同时通过与酪氨（苯氧基）自由基反应来抑制二聚酪氨酸的产生。当单独暴露在02-(+02)时，没有氨基酸的损失或二聚酪氨酸产生。由于·OH单独作用或者·OH+02-(+02)进一步影响产生的氨基酸的修饰可以导致BSA的整体电荷量的改变。在3.7-6.2的pH范围内，一些16个新的等电点聚集带被·OH诱导产生，约8个新的带被·OH + 02- (+02)诱导产生。一级结构的改变提供了一个去理解氧化修饰和增加蛋白水解敏感性之间的联系的要点。 在前面的文章(1)中指出,氧自由基能够氧化修饰蛋白质并通过细胞内蛋白水解系统增加其降解。越来越多的文献表明,氧化改性和蛋白水解作用可能密切相关(1-19)。然而，我们对氧化改性蛋白质被识别和降解的机理知道的很少。要了解细胞内的蛋白水解系统识别和降解氧化改性的蛋白质,首先需要仔细描述这种修饰作用。 先前关于蛋白质的自由基损伤的研究表明，各种各样的反应都可能发生(20-28)。在前面的文章(1),其中的一些反应虽然到目前为止还没有建立因果关系，却被发现与蛋白水解敏感性增加一致。为了改善我们对潜在的蛋白水解作用的“信号”的理解,我们现在执行蛋白质一级结构被氧自由基修改的剂量反应研究。我们和其他研究人员观察到（1—19），改变原结构无疑是在蛋白酶解基础上蛋白一级结构的改变。在随后的论文（2）中，我们研究了蛋白质二级和三级结构的修饰，并且修饰和蛋白水解的敏感性之间的联系也在本系列的第四篇文章探讨了（3）。 由于各种原因我们决定把努力集中在对牛血清白蛋白（BSA）1的研究上。在前面的论文（1）中，BSA被证明是可以被氧自由基改性修饰的，表现出要么是易碎性，要么是增强的蛋白水解的敏感性。BSA的出现对先前研究的17蛋白（1）是一个很好的模型，它还增加了优势：它摆脱了辅基和其它一些复杂的因素。BSA的一级，二级，和三级结构在文献（29，30）已得到很好的特征化，并且有BSA被氧自由基修饰的几种报告可供比较（31-35）。最后，BSA是一类主要的动物蛋白，并且其纯化形式可以被迅速利用。在之前的报告（1）我们已经把BSA暴露在羟自由基（·OH），超氧阴离子（02-），以及·OH + 02-