细胞生物学荧光技术原理和应用.docVIP

《细胞生物学荧光技术原理和应用一、书名：细胞生物学荧光技术原理和应用二、著者：刘爱平 主编 三、出版社：中国科学技术大学出版社2007-2-1四、页数：320 五、内容大意： 随着生命科学研究的快速发展，生物荧光技术在细胞免疫学、微生物学、分子生物学、分子遗传学、神经分子生物学、病理学、肿瘤学、临床检验学、医学、植物学等方面的应用越来越广泛；制备各种荧光生物样品的方法越来越多；用于荧光检测的仪器种类不断增加，而且也越来越先进。荧光技术已经成为生命科学研究的重要手段之一。本书共分三部分：第一部分介绍荧光的基本知识、发展史、荧光探针、活体荧光材料——绿色荧光蛋白(GFP)及最新型荧光材料——量子点；第二部分介绍荧光技术在生命科学中的应用及荧光生物样品的制备方法；第三部分介绍了中国科学技术大学生命科学学院现已拥有的生物荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、细胞遗传工作站、活细胞荧光工作站、流式细胞仪、荧光定量PCR仪等荧光检测仪器的基本原理、操作步骤及注意事项。书中彩页的大部分照片是使用中国科学技术大学生命科学学院拥有的上述各种荧光检测仪器获得的。六、读后心得：π-π共轭体系。有机化合物分子中具有的π电子共轭结构者，其荧光效率随着π电子共轭程度的增加而增大，所发生的荧光光谱也将向长波长方向移动。任何有利于提高π电子共轭程度的结构改变，都能提高荧光效率或使荧光波长长移。菁染料是一类具有特殊结构的功能性化合物，其分子内部含有n个次甲基－CH＝（称为甲川基）组成的共轭链（n可为奇数或偶数），共轭链与其两端或中间连的杂环、芳环、环烯化合物等形成了一个大的π共轭体系。它具有摩尔吸光系数高、光谱响应范围广以及荧光量子产率高等特性菁染料在核酸测定、蛋白质分析、作为活细胞染色剂、肿瘤检测及癌细胞识别、作为生物大分子的标记物及光动力疗法中应用。染料可以透过细胞膜进入细胞中，将线粒体染色，而且发现对线粒体染色具有特异性。Ca2+动态平衡中发挥着重要作用，是与细胞死亡关系最为密切的亚细胞结构之一。内质网是细胞内钙储备和钙信号转导的主要部位，当前研究认为细胞内的钙稳态主要是通过内质网来实现的。许多光敏剂与细胞温育后定位于内质网，部分光敏剂经过合成后转运最终定位于内质网，因此内质网是光动力作用的一个非常重要的损伤靶点。细胞质膜是光敏剂最先接触的部位，是亲脂性光敏剂的首选位点，而亲水性光敏剂也优先聚集于此，细胞质膜成分因此成为光动力损伤的重要靶点。广泛的细胞质膜损伤主要引起细胞坏死，原发损伤则通过激活相关信号途径诱导细胞凋亡。溶酶体是细胞内由一层单位膜包围的膜性细胞器，内含各种酸性水解酶，能分解各种内源和外源性的物质。定位于溶酶体的光敏剂在光照射后通过溶酶体酶释放到细胞质引起细胞凋亡。和其他几种光敏剂相比，细胞凋亡的过程非常缓慢。真核细胞的空间结构由细胞骨架维持，微管、微丝以及中间丝这三种类型的细胞骨架在结构上相互连接，彼此协同发挥作用。近年对细胞凋亡信号转导的研究发现：三种细胞骨架在细胞凋亡过程中变化非常活跃：其调节细胞内钙离子浓度的作用已受到广泛关注。有研究显示：细胞骨架是某些光敏剂介导的光动力损伤的重要靶点。然而目前，光动力疗法对肿瘤细胞的杀伤效率还不理想。治疗后还会发现残存的肿瘤细胞，其可能原因之一是：细胞内Ca2+浓度的升高激活了细胞内的多种酶系统，既能诱导细胞凋亡，也能同时激活细胞内的保护机制，导致一些肿瘤细胞可能在光动力损伤后得到及时修复，从而影响了光动力疗法的损伤效果，但目前对钙信号所激活的细胞自身保护机制了解不多。相信，随着对光动力疗法中钙信号转导机制的深入研究和阐明，将来可以通过抑制Ca2+激活的细胞保护机制来提高PDT的杀伤效率，使光动力疗法在肿瘤治疗中发挥更大作用。 在PDT疗法中,不同结构的菁染料因其性质不同,故作用也不同。某些菁染料如份菁及氧代菁因其自身对某类细胞具有辨识性,能选择性地进入标示癌细胞或作为光毒剂杀死癌细胞,可直接作为光敏剂用PDT中,或作为辐射敏化剂用于固体肿瘤的治疗中。而大多数染料不具备对特定器官及组织的选择性.因此,这类染料必须与生物活性载体如蛋白质、肽、脂类相连结,才可能使染料进入身体内的特定区域。 21世纪是生命科学的世纪，揭开生命现象的神秘面纱,探寻不治之症的秘药良方, 已成为科学研究的重点。随着生物技术的快速发展,荧光分析技术在基因测序、表达,蛋白质测序及临床诊断等方面的应用将占有重要地位,而性能优良的荧光探针的开发则是发展这一技术的决定性因素。对于菁染料的研究及应用尽管已有100多年的历史,但由于其自身结构的优越性而历久弥新。为设计和开发性能良好的荧光探针,应着重研究染料的性能与分子结构的关系,以便研究开发出具有优良性能的菁染料用于生物医学领域。