06真核生物的遗传解决方案.ppt

* * （4）HAT技术选择杂种细胞 如何将杂种细胞与它们的亲本细胞区别开、选择出来？ HAT technique /HAT culture medium (含Hypoxanthine-aminopterin-thymidine) 次黄嘌呤 氨基喋呤 胸腺（胸腺嘧啶脱氧核苷） 利用只有杂种细胞由于合成核苷酸的从头合成途径被氨基喋呤阻断后，可利用补救途径合成DNA（核酸），细胞能够分裂繁殖生存，而非杂种细胞因其补救途径（应急途径）被HGPRT－、TK－阻断，不能合成DNA，不进行生长而死亡，来选择杂种细胞。 * 1）DNA的生化合成途径： 在细胞中核苷酸的生物合成有两条途径：一条是从头合成的主要途径，是由糖（核糖或脱氧核糖）加氨基酸进行合成。 如果代谢拮抗物 氨基喋呤（aminopterin）存在时，则这一途径受阻。但如果细胞中有由DNA或RNA降解而来的嘌呤或嘧啶存在时，在酶的作用下，形成核苷可走第二条途径，即由核苷转化成核苷酸的补救途径（salvage pathway）。 * 胸苷激酶TK （thymidinekinase） 细胞中有两种酶： 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶