中华鳖肉多糖不同提取工艺的比较研究.docxVIP

网址: HYPERLINK 中华鳖肉多糖不同提取工艺的比较研究 张 燕 摘 要:目的：通过中华鳖肉多糖不同提取工艺的比较，找出一种简单、方便、稳定的中华鳖肉多糖提取工艺。方法：采用碱提法和超声提取法提取中华鳖肉多糖，并用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果：实验结果显示超声提取的粗多糖得率明显高于碱提法，但是碱提法提取的中华鳖肉多糖含量高于超声提取法。结论：采用碱提法提取中华鳖肉多糖简便易行、稳定可靠。 关键词：中华鳖肉；多糖；碱提；超声提取 多糖又称多聚糖，是一种具有广泛生物活性的大分子，它广泛存在于动植物体内，不仅是生物的营养成分，而且还参与多种生命活动。本项目研究采用两种不同的提取方法对鳖肉多糖进行提取，即碱提法与超声提取法，碱提法是近年来用于动物多糖提取较常用的提取方法，而超声提取法利用超声波提取效率效率较高，也常用于多糖的提取，根据实验结果来确定较佳提取工艺，为中华鳖的进一步开发利用提供科学的依据。 1 实验材料与仪器 1.1 材料 原料按一定品质要求，选用浙江省上升农业有限公司的中华鳖成品。 1.2 试剂 1.2.1 0.1mol/L的NaOH的配置：取1.5gNaOH固体，溶于125ml蒸馏水中，得到NaOH溶液 1.2.2 其他试剂：三氯乙酸，苯酚，硫酸，丙酮，α-萘酚、葡萄糖标准品，所用的乙醇均由国产分析醇配置，水为蒸馏水。 1.3 仪器 YXJ－2型高速离心机（中华人民共和国常州金璮电讯电器厂）、 KQ－250DE型数控超声波清洗器（昆布超声仪器有限公司）、W201B数控恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）、GZX-9070MBE数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、分析天平等。 2 实验方法与结果 2.1 鳖肉提取方法 前处理：将速冻的中华鳖解冻后，去除内脏、甲壳、甲骨，鳖肉洗净沥干后剪碎，放于700C烘箱中烘干备用。 2.1.1 碱提法 根据文献资料，确定工艺流程如下：取四份干燥鳖肉50g，分别加入100ml 0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/LNaOH溶液，于60OC水浴中保温24小时，取出滤液，再在鳖肉中加100ml同样浓度的NaOH，做第二次提取，如此反复三次，将所得滤液合并，冷却后，用三氯乙酸调PH至4左右或者至溶液不再混浊，5-10OC放置过夜，4000r/min离心30min，取上清液，加2倍乙醇摇匀，出现絮状沉淀后静置，抽滤，取沉淀加适量90%乙醇振荡，静置，倒出上清液，得沉淀1。上清液用无水乙醇处理2次，抽滤，得沉淀2，将沉淀1和沉淀2合并后再用无水乙醇洗2次，将沉淀平摊于蒸发皿上50OC烘干，得粗品。具体结果表1所示，结果发现0.1mol/L的NaOH产量最高，所以采用该浓度NaOH提取产量计入总结果，与超声提取法结果进行比较。 表1：不同浓度NaOH对粗多糖产量的影响 浓度 0.1mol/L 0.2mol/L 0.3mol/L 0.4mol/L 粗多糖产量 9.23g 9.02g 8.56g 7.26g 2.1.2 超声提取法 分别取已剪碎烘干的鳖肉15g，用90%乙醇在60OC条件下回流2小时，过滤，将沉淀置于40OC烘箱烘干。加2倍量的水分别在60KHz、70KHz、80KHz、90KHz, 50OC、60OC、70OC、80OC下超声提取100min,过滤，滤液在80OC下浓缩，浓缩液加乙醇至乙醇浓度为80%，4000r/min离心30min,取沉淀于50OC烘箱中干燥，得粗品。 将两种方法提取的粗多糖分别纯化得较纯的中华鳖多糖。 2.2 多糖含量测定 精密称取干燥恒重的葡萄糖标准品80mg，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，配置成浓度为0.80mg/ml的葡萄糖标准溶液，精密量取此标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7ml,分别置于10ml具塞试管中，加蒸馏水补充至1.0ml，加5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5ml,即可摇匀，室温放置10min后置沸水浴中加热，取出，冷水冷至室温。另取1ml蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸，同法操作，作为空白对照，在490nm处测定吸光度。以吸光度（A）对葡萄糖含量（C）进行回归，得回归方程：A=-0.0451+0.0135C,相关系数r =0.9994.标准曲线图表如表2和图1所示。 表2：标准曲线（数据） 编号 1 2 3 4 5 6 7 X轴（ug/ml） 5 1