普通微生物学课后习题及答案第三章.doc

病毒:病毒是一套核酸模板分子，裸露或包裹在由蛋白质或脂蛋白组成的一个或一个以上保护性衣壳中，只能在适当的寄主细胞内完成自身的复制。 病毒的特点：1、个体微小，缺乏细胞结构。2、主要化学组成均有核酸和蛋白质，且只含一种类型核酸（DNA或RNA）作为遗传信息载体。3、缺乏完整的酶和能量代谢系统，宿主细胞内专性寄生4、以复制和装配的方式繁殖，没有生长5、在体外存在无生命的大分子形式，并能保持侵染性6、具有受体连接蛋白，与敏感细胞表面的病毒受体连接，进而感染细胞7、对一般抗生素不敏感，对干扰素敏感。病毒生存存在形式有两重性：既有无生命的化学大分子属性，又有生物的基本特征；既有细胞外感染性颗粒形式，又具有细胞内繁殖的基因形式。 二元培养法：病毒是活细胞内严格寄生的，不能再人工培养基上培养，只能采取连同寄主一块培养的方法，称为二元培养法。 寄主接种法：噬菌体标本可接种于生长在培养液或培养基平板中的细菌培养物，感染后培养液由混浊变为清亮，而平板成为残迹。 植物病毒标本可以接种于敏感植物叶片，产生系统侵染或坏死斑。 动物病毒可以接种于敏感动物的特定部位，嗜神经病毒接种于动物脑内，嗜呼吸道病毒接种于动物鼻腔，嗜皮肤病毒接种于动物皮下或皮内。接种病毒后，隔离饲养，每日观察动物发病情况，根据动物出现的症状，确定是否有病毒增殖。 鸡胚培养法：不同的病毒可选择不同日龄的鸡胚和不同的接种途径，如痘病毒宜集中于10~12d的鸡胚绒毛尿囊膜上，鸡新城疫病毒宜接种在10d鸟囊腔和羊膜腔内，虫媒病毒宜接种于5d卵黄囊，继续培养观察。 细胞培养法:用机械方法或胰蛋白酶等方法将离体的活组织分散成单个的细胞，在平皿中制成贴壁的单层细胞，然后铺上动物病毒悬液进行培养。植物病毒也可以采用细胞培养。 细胞病变效应：大多数动物病毒感染敏感细胞培养物都能引起显微变现的改变。 病毒的纯化：用一定的方法出去病毒制备样品中混杂的细胞或组织成分、培养基成分、可能污染的其他微生物与杂志，得到纯净的有活性的病毒样品。 病毒的释放：破碎感病的寄主细胞，如用手研磨、反复冻融、电动搅拌器或超声波振荡器破坏亚细胞结构，释放病毒。 病毒的抽提：提取缓冲液要根据病毒粒子的等电点来选择最稳定、溶解度最大的种类和PH，一般选择磷酸缓冲液或乙酸缓冲液。为防止毒粒聚集变性，提取液常加入非离子去垢剂，如Tween-80或低浓度尿素。为减少植物细胞酚氧化酶及酚类化合物影响，还要加入还原剂如巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）及螯合剂EDTA等。 病毒的抽提夜的分级纯化：利用病毒和寄主细胞的理化性质的区别，如大小、形状、密度、表面电荷等，把病毒分级纯化，减少寄主细胞物质的污染。1、清除较大细胞器通过5~15min低速离心。2、去除寄主蛋白质：沉淀法：用各种沉淀剂把病毒与寄主杂蛋白分离。离心法：由于大多数毒粒在某种介质内的沉降速度与寄主的组分有差别，使用离心法可有效纯化病毒。凝胶色谱法：利用分子大小和扩散速率来区分它们，也叫分子筛色谱。电泳：利用提取液组分表面电荷密度的差别，产生不同电泳迁移率来纯化病毒。 感染力的测定：对病毒活性的测定，定量的测定病毒活性又称滴定。 感染单位：与寄主产生特异性反应所用最小的病毒数量IU。每单位体积中所含感染单位的数量称病毒的效价或滴度IU/ML表示。 噬菌（蚀）斑技术：噬菌体和动物病毒的滴定方法是计算病毒在铺满的菌苔或动物单层细胞上产生的噬菌斑或蚀斑数，以噬菌斑和蚀斑形成单位pfu表示。 噬菌斑：某种经稀释的病毒悬液分别与敏感菌悬液及半固体琼脂培养基混匀后，倒入含较高浓度琼脂培养基的平板上，经培养一段时间后，在菌苔上产生一个个圆形局部透明的区域即噬菌斑。这种测定噬菌体效价的方法叫双层平板法。 蚀斑与病灶：某些动物病毒在单层细胞中培养并加以染色处理，由于对细胞裂解而形成的肉眼可见的局部病损区域。如果是肿瘤病毒，细胞不裂解，而是增生堆积成病灶。 枯斑：一些植物病毒在敏感植物茎叶等组织上形成一个个褪绿或坏死的斑块。 红细胞吸附法：用红细胞悬浮液覆盖在单层细胞上，经一定时间后洗脱游离的血细胞，受病毒感染的单层细胞有聚集、固定红细胞的能力，从而被“染色”识别出来。 稀释终点法：取等体积的经梯度稀释的病毒系列悬浮液分别接种敏感寄主，以半数群体出现感染反应的病毒剂量确定病毒的样品效价，称半数效应剂量。如使半数宿主细胞死亡的病毒剂量称半致死剂量LD50 半数寄主细胞发生感染的病毒剂量半数感染剂量ID50，半数组织培养物发生感染产生细胞病变效应，称半数组织培养感染剂量TCID50. 病毒的形态和大小：病毒在繁殖过程中产生完整、成熟的病毒颗粒，一般呈球状，杆状和蝌蚪形，也有卵圆形砖形和弹状等。病毒十分微小，只能在电镜下才能看到。不同类型的病毒大小差异很大，成熟的病毒通常用纳米表示。 病毒的基本结构：核酸位于