硫丹检测试剂盒使用说明.docVIP

硫丹检测试剂盒使用说明1.检测原理 该试剂盒基于免疫学中抗原抗体的反应原理制成。硫丹抗体包被于酶标板孔中，样品中存在的硫丹能与硫丹酶标记物竞争性地结合板中定量的抗体，采用直接竞争酶联免疫吸附法检测硫丹。1.1 含有硫丹的样品提取液加到包被有抗体的酶标板中，同时加入硫丹酶标记物，两者竞争性的结合抗体结合位点。1.2 混合物室温放置60分钟，然后将未结合的物质洗掉。1.3 将底物溶液加入酶标板中，与酶作用后显色。因为酶标板每孔包被有相同量的抗体，每孔将会结合等量的游离抗原及酶标记抗原，当样品中含有较多的硫丹时，每孔抗体结合的酶标记抗原的量则少，酶显色后的颜色则浅，反之，颜色深，因此颜色深浅与样品中待检抗原的量成一定相关性。2.产品特性该试剂盒适用于有机氯农药硫丹的快速检测，不能检测其他种类农药。适于土壤，水，蔬菜，水果，茶叶，烟草，畜肉，虾等试样。3.试剂盒组成硫丹标准溶液(10ug/mL)硫丹酶标记物掩蔽剂浓缩液（注：每次使用前需用PBS溶液1：20稀释得到掩蔽剂稀释液）酶底物A液、B液5ⅹPBS溶液洗涤液（注：每次使用前需用Millipore超纯水1：5稀释）包被有硫丹特异抗体的96孔酶标板一个（12*8）4.试剂盒未提供而检测需要的其他试剂及设备4.1仪器酶标仪(含450nm,650nm)单道微量移液器：1-20 uL，200－1000 uL 和1000－5000 uL多道移液器：50－200 uL振荡器：用于样品提取玻璃器皿：玻璃瓶，试管，量筒洗板机或洗瓶：用以冲洗酶标板涡旋混合器4.2试剂终止液： 1.25M硫酸掩蔽剂稀释液：将试剂盒提供的掩蔽剂浓缩液用PBS溶液1：20稀释磷酸盐缓冲液PBS：13.8g Na2HPO4.12H2O ，1.6 g NaH2PO4.H2O，9.0 g NaCl溶液Ⅰ：含10％甲醇的掩蔽剂稀释液5. 样品处理5.1前处理干燥产品：将样品全部磨碎，四分法缩分。水果蔬菜类：如有泥沙，先用水洗掉，然后除去表面附着的水分，取食用部分，沿纵轴剖开，切成四等分，取相对的两块，切碎，混匀。5.2提取红豆，绿豆，芹菜：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释20倍后进行测定。水果：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释20倍后进行测定。蔬菜（大白菜，蒜，葱，茼蒿，小松菜，甘蓝，芦笋）：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定。胡萝卜：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释15倍后进行测定。牛肉,羊肉,鸡肉：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入20mL甲醇，涡旋剧烈混合2min，过滤,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定。姜,毛豆:称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入20mL甲醇,机械振荡(250rpm/min)提取1小时。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释50倍后进行测定。花生：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入20mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。25℃，4800r/min下离心5min，吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释100倍后进行测定。菠菜：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释80倍后进行测定。茶叶：称取5g粗粉碎样品到玻璃瓶中，加入25mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取过夜。静置，吸取少量上清液（一般为20uL-50uL）用掩蔽剂稀释液稀释900倍后进行测定。烟草：称取10g粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入50mL甲醇，机械振荡（250rpm/min）提取1小时。静置,吸取少量上清液用掩蔽剂稀释液稀释200倍后进行测定。鳗鱼：取5g 待测样，搅碎后加入10ml甲醇，漩涡混匀提取2 min，用滤纸过滤；取滤液，用掩蔽剂稀释液稀释40倍。虾：称取10g待测样，搅碎后加入20g无水硫酸钠搅匀，再加入20ml丙酮和1.04M硫酸锌溶液、0.36M亚铁氰化钾各200μl，漩涡混匀提取2 min；25℃，4800r/min下离心5min。取全部上清液浓缩至干；加入50%甲醇水8ml，充分溶解，滤纸过滤。注：1.此方法需要阴性样做标准曲线。阴性样处理方法同待测样，梯度稀释方法可参考6.1.2硫丹标准溶液的稀释，以阴性样品溶液代替溶液Ⅰ。6．分析步骤检测前将所有的试剂和待测样品放置至室温，在操作过程中，不要将