组织培养技术在葡萄无菌苗生产的应用.docVIP

组织培养技术在葡萄无毒苗生产的应用，、 ViniferaL. 隶属葡萄科葡萄属的藤本植物，在世界上分布范围广，栽培面积大，其产量仅次于柑橘位居果树中第2 位。当前，葡萄与葡萄酒已成为国际重要商品，每年葡萄生产量的80%均用于制酒，酿酒葡萄品种的培育与种植前景十分广阔。。但葡萄病毒病迅速蔓延, 严重威胁葡萄产业的健康发展。对葡萄病毒病的防治除拔除病株、严禁采用带毒接穗和砧木外, 最根本的措施就是大量培育无病毒苗木。利用组织培养进行脱毒不但突出了生产的实用性, 而且可以节省人力物力, 使脱毒工作更加简便有效。 葡萄主要病毒病 1.1葡萄扇叶病 葡萄扇叶病又名葡萄退化，世界葡萄产区均有分布，在我国普遍发生，是影响我国葡萄生产的主要病害之一。病毒的不同株系引起寄主产生不同的反应，有3种症候群葡萄扇叶病毒属线虫传多角体病毒组，机械传染，病毒颗粒同轴，直径30纳米，具角状外貌。扇叶病毒极易进行汁液接种，病毒可侵染胚乳，但不能侵染胚，故葡萄种子不能传播，但试验草本寄主可由种子传播。病毒的自然寄主只限于葡萄属葡萄卷叶病具半潜隐特性，在大部分生长季节不表现症状，多数欧亚种病株在果实成熟阶段才出现症状。在采收后到落叶前叶片症状最明显，叶缘反卷，脉间变黄或变红，仅主脉保持绿色；有的品种则叶片逐渐干枯变褐。卷叶病发生于葡萄的所有品种。症状随品种、环境和季节而异。春季的症状较不明显，病株比健株矮小，萌发迟。葡萄卷叶病可能是由复杂的病毒群侵染引起，其成员大多属黄化病毒组。葡萄茎痘病的主要特征是砧木和接穗愈合处茎膨大，接穗常比砧木粗，皮粗糙或增厚，剥开皮，可见皮反面有纵向的钉状物或突起纹，在对应的木质部表面现凹陷的孔或槽。葡萄染茎痘病后长势差，病株矮，春季萌动推迟月余，表现严重衰退，产量锐减，不能结实或死亡。病毒有关毒源种类尚在研究中1/2MS+6-BA+IBA+GA,不同品种的6-BA 和GA的浓度不同。另一类为生根培养基在生产上常用的是1/2MS+生长素。培养基琼脂浓度0.75%。培养基中蔗糖浓度和各种生长素的浓度需要根据不同品种进行调配，选定最适浓度。在生根培养基中生长素的选用上，有研究发现IBA效果要比NAA的好【1】 2.2 采取材料对消毒效果的影响 不同时间取材，消毒效果不同，随着取材时间的推迟，葡萄病害越南来越重，消毒效果越来越差，而且消毒成功的茎段成苗也越来越少. 采集外植体时，应采集正在生长的葡萄树的上部嫩枝，停止生长的植株不宜采取[2]同时，外植体的采集不宜在雨天或者雨后立即进行。雨水会携带大量病菌，从而加大消毒的难度。 另外，在郎凤红的试验中她发现在消毒效果和成苗率上，赤霞珠要优于蛇龙珠、梅鹿特及霞多丽。因此在选择组培苗品种时候应该优先考虑消毒效果和成苗率高的品种。 2.3 不同激素在诱导葡萄愈伤组织的影响 植物激素是影响植物组织培养中愈伤组织、茎尖分化和生根关键因素之一，具有刺激形成层细胞分裂、诱导愈伤组织和不定芽的形成等生理作用[3-4] 目前，2,4-D 在葡萄愈伤组织的诱导中使用较为广泛，鲍雪珍、卢炳芝等通过使用一定浓度的2,4-D 诱导胚性愈伤组织发生[5-7]。而在张丽关于5个酿酒葡萄组织培养的实验中却发现2，4-D并不能很好的诱导出酿酒葡萄的愈伤组织，但是利用NAA0.5mg/L与6-BA.2.0mg/L组合对愈伤组织诱导效果明显，另外在她的实验中，添加GA30.2mg/L到培养基中，对五个品种的茎尖愈伤组织的分化效果有明显的提高，从这些结果来看，激素的水平和种类不同品种间作用效果差别较大，每个品种的组织培养及再生体系建立时，需要对激素浓度进行较多的调整才能找到最适浓度，这也是组织培养技术的关键之一。 2.4 葡萄苗脱毒技术 目前使用的脱毒技术主要分四种：热处理脱毒、茎间培养脱毒、花药培养脱毒和低温脱毒。热处理脱毒法是利用高温下植物组织中的病毒部分或者全部失活的方法。利用某些病毒受热后不稳定的特点，将葡萄完整植株或组织器官进行热处理，使病毒失去活性。但这种方法局限太大，缺点很明显，对一些耐热病毒不起作用，从外植体本身来讲，也只适合一些耐热性好的品种，因此作为单一的脱毒技术在生产上使用效果不佳。 茎间培养脱毒是目前应用最广的脱毒技术之一[8-9] 其原理是由于病毒没有自己的新陈代谢和病毒复制途径，因此病毒的复制是依赖寄主细胞的蛋白质和核酸合成机理和机制的路径进行的。因为病毒复制抑制剂对寄主细胞有毒，所以病毒控制是很困难的。大部分病毒不攻击芽的分生组织，因为分生组织细胞的增殖要比病毒的复制速度快，这就使茎尖培养脱毒成为可能。一般来说，可直接从大田中获取的葡萄茎尖以组织培养方式获得无菌苗，通过病毒检测后，再切取无菌苗的茎尖分化成苗，栽植后再经病毒检测证明无毒后即可作为原种母树，用脱毒母树提供无病毒营养系砧木或优种繁殖材料。而