DNA胶回收.docVIP

关于DNA胶回收的一些东西 ? 2012-08-28 21:01:59 标签：? 杂谈 分类：?资料 这几次做胶回收的回收率都不高，所以很就纠结啊。逛论坛的时候发现原来中科大IGEM实验的胶回收也跟我们情况差不多，于是去看了一下他们的论坛，就把中科大师兄师姐的经验拿过来先了，希望我们的后续实验能顺利些，前面时间有点拖得久了....1.切胶时放在不吸水的PE手套上，但是PE手套一旦滑动将导致质量的改变，因为说DNA主要在琼脂糖颗粒的缝隙中，也就是TAE缓冲液里，所以吸水过强会导致DNA损失。2.胶回收的Eluent要预热这个已经不用多说。我们平时加入Eluent一般静置1-2min，后来在学姐的建议下我延长了静置时间，后来浓度很高的两次都是在5分钟以上，30ng/ul的那次是5分钟，51ng/ul的那次是在65摄氏度水浴中盖盖静置10分钟。取得了很好的效果，回收浓度比较高（以前经常是10ng/ul）。 主要就这两点，尤其是第二点，个人认为第二点确实很重要。因为我们平时会遇到片段小了挂不上（用异丙醇），片段大了洗不下来。我们有的时候是几kb的，一般属于第二种情况，这时就应该延长加入Eluent的静置时间，以获得更高的回收率。3.照胶一定要快，长时间的紫外照射会引起序列的突变。4.切胶时注意把胶块切得小些，但是要切掉所有目的片段。胶块太大不容易溶解，而且会使得浓度低