2.2.1动物细胞培养和核移植技术课件.pptVIP

植物组织培养和动物细胞培养的比较： 讨 论： （课本49页） 黑面绵羊去核卵母细胞 白面绵羊 体细胞 a 重组细胞 电脉冲刺激 早期重组胚胎 b 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊 ②、写出a b所代表生物技术名称：a表示： b表示: ③、多利面部毛色是： 据遗传学原理说明判断依据。 核移植 胚胎移植 白色 多利全部的核基因都来自白面绵羊 趁热打铁： ①克隆羊的产生属于什么生殖方式？ 无性生殖 * * * 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 这些技术的理论基础是什么？ 技术：植物组织培养 和 植物体细胞杂交 原理：植物细胞的全能性 动物细胞全能性如何？ 复习提问 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 基础 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 1、 概念：从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、原理：细胞增殖 （有丝分裂） 一、动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 分瓶培养 贴壁生长 接触抑制 动物细胞生长特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 那么什么是接触抑制？ 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 接触抑制 动物细胞生长特性 通常取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 因为其分化程度低、增殖能力强，更容易培养。 说明动物细胞间的主要物质是蛋白质。 1. 动物细胞培养对培养的材料有要求吗？ 3. 用胰蛋白酶处理，组织就会分散成单个细胞，说明了动物细胞间的物质是什么成分？植物呢？ 2. 为什么在培养前要将组织分散成单个细胞？ 如何分散？ 使细胞与培养液充分接触，便于吸收O2和营养物质，排出代谢废物； 4.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。 思考题 剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。 植物细胞间主要是果胶。 因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。 保存10代以内的细胞。 8、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 7、有些为何能一直传下去？ 发生突变，朝着癌细胞方向发展。 6、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 不都能 5、如何区分原代培养和传代培养？培养过程中两次用到胰蛋白酶，作用相同吗？ 原代培养与传代培养的分界点为分瓶的继续培养。 第一次用胰蛋白酶处理剪碎的组织使之分散成单个细胞， 第二次使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来。 10、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。 动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。 9.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理；添加一定量的抗生素;定期更换培养液； 2、营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等 动物血清、血浆 3、温度和pH 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 维持培养液的PH 细胞代谢所必需的 补充合成培养基中缺乏的物质 1、生产生物制品 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等； 3、用于检测有毒物质及毒性； 2、动物基因工程离不开动物细胞的培养； 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、 病理、 药理等方面的研究。 阅读P46-47 培养目的 培养结果 均为 操作，需要适宜的条件。 其他条件 取材 培养基特有成分 培养基性质 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 葡萄糖 动物血清 促生长因子 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或 细胞分泌蛋白 植物器官、 组织或细胞 胚胎或幼龄动物的器官或组织 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 获得新个体 或细胞产品 大量产生细胞