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专业教学资源库 动物检疫检验技术 专业教学资源库 动物检疫检验技术 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 专业教学资源库 动物检疫检验技术 专业教学资源库 动物检疫检验技术 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 亚硝酸盐的测定 主讲人：崔晓娜 亚硝酸盐是食品添加剂中急性毒性最强的物质之一 大剂量的亚硝酸盐进入人体内会造成中毒 亚硝酸盐在一定条件下会转化为亚硝胺，而亚硝胺是一种强致癌物质，长期大量食用有致癌的隐患。 背景知识 第一法：离子极谱法 第二法：分光光度法 —盐酸萘乙二胺法 亚硝酸盐的测定方法（GB/T 5009.33-2010） 实验原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，于波长538nm处测定其吸光度后，可与标准比较定量。 盐酸萘乙二胺法 盐酸萘乙二胺法 试剂 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并定容至1000ml。 醋酸锌溶液：称取220g醋酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至1000ml。 硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。甲基红-乙醇指示剂（2g/L） 0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。 盐酸萘乙二胺法 试剂 0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水中，避光保存。 亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24小时亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200ug亚硝酸钠。 亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每ml相当于10ug亚硝酸钠。 盐酸萘乙二胺法 仪器和器材 小型粉碎机（或匀浆机）、分光光度计、水浴锅、 电子天平、电炉、温度计 容量瓶（500ml）、 比色管（50ml）、 比色管架、吸管、漏斗、 三角烧瓶、烧杯等。 盐酸萘乙二胺法 操作方法 样品处理 称取样品5g，加去离子水10ml，用匀浆机捣碎，用少 量去离子水冲洗倒入 50ml烧杯中。 加入12.5ml硼砂饱和液，搅拌匀，用约150ml去离子水 将样品匀浆液洗入250ml容量瓶中，80℃水浴20min， 取出。 加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀；再加入5ml乙酸锌溶液，充分振摇混匀，以沉淀蛋白质。 加水至刻度，摇匀，放置0.5h，除去上层脂肪，过滤，弃初滤液30ml，其余滤液备用。 盐酸萘乙二胺法 标准曲线制备与样品测定 管号（50ml比色管） 0 1 2 3 4 5 6 7 8 样11 样12 亚硝酸钠标准液(ml) 样品滤液(ml) 对氨基苯磺酸溶液 (ml) 盐酸萘乙二胺溶液 (ml) 加去离子水至50ml 吸光度 0.0 - 2 混 1 混 0.2 - 2 匀 1 匀 0.4 - 2 静 1 静 0.6 - 2 置 1 置 0.8 - 2 3-5 1 15 1.0 - 2 分 1 分 1.5 - 2 钟 1 钟 2.0 - 2 1 2.5 - 2 1 - 40 2 1 - 40 2 1 波长538nm、1cm比色杯、零管调零 盐酸萘乙二胺法 管号（50ml比色管） 0 1 2 3 4 5 6 7 8 样11 样12 亚硝酸钠标含量(μg) 吸光度(A) 0 1 2 3 4 5 7.5 10 12.5 — — 结果记录 标准管和样品管比色结果记录 标准曲线制绘制 绘图、回归方程、计算样品管亚硝酸盐含量（μg） 盐酸萘乙二胺法 ??? 结果计算 X—试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A—测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg））； m—试样质量，单位为克（ｇ））； 盐酸萘乙二胺法 结论 查肉制品中亚硝酸盐限量标准作出结论 （标准名称、编号、限量标准值、结论） 讨论 影响实验结果准确性的因素有哪些？ 亚硝酸盐的测定方法（GB/T 5009.33-2010） 盐酸萘乙二胺有致癌的作用，使用时注意安全。