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2、叶绿素的提取 在研钵中放入几片（约5g）菠菜叶（新鲜的或冷冻的都可以。如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分）。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液，适当研磨。将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加人10 mL饱和NaCl溶液（防止生成乳浊液）除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g入无水Na2SO4干燥。干燥后的液体倾至另—锥形瓶中（如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩）。 1．提取液的改进 除丙酮外，也可用酒精替代，结果大致相同。和酒精相比，丙酮有一定毒性，因而不妨换一下；另外一种提取液是：在加入丙酮2～3ml后，再加入2ml石油醚，可以提高胡萝卜素提取效果，色素带分离现象更明显。 2．层析液的改进 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，教材上给出了两种层析液配方：一种是93号汽油，另外一种为20份石油醚，2份丙酮，l份苯混合而成。采用下列配方实验效果也不错： （1）四氯化碳加少许无水硫酸钠； （2）95％的酒精； （3）9份95％酒精加1份苯； （4）20份汽油，2份丙酮，2份石油醚，1份苯。 其中，采用配方（4）效果最好，配方（2）经济而且简便一些，但效果有一定折扣。 3．设立对照实验 设立一个空白对照组，在其他条件完全相同的情况下，一个画滤液细线，而另外一个不画，结果进行对照，消除“不同色带是层析液在滤纸上扩散后留下的颜色”的怀疑。这样同时也培养严谨的实验作风，体现生物学科研的基本原则。 为了强调不要使层析液浸没滤液细线的意义，也可以设立这样一个浸没滤液细线的对照组，结果会发现色素被溶解下来，而无法分离。 4．实验方法探索 本实验不仅可用条形滤纸进行层析，还可以采用圆形滤纸层析办法：取平面培养皿1只，铺一层细纱(厚约0．5cm)，将滤纸剪为圆形放人培养皿中，在圆形滤纸中央点上滴2滴色素提取液，静置约1min，然后依次滴35滴层析液，每滴中间间隔30s，然后盖上培养皿盖，几分钟后，可以观察结果会得到近似同心圆的4个色素环，由内而外分别是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。此实验关键有两点：一是几次滴液体要在同一点上，否则不能形成圆环；二是滴层析液的量和时间要掌握好，否则会影响效果，甚至失败。 “叶绿体中色素的提取和分离”实验改进（2） 1．提取色素 为了得到墨绿色的色素滤液，于实验前2～3天，取质地柔软、深绿色的草本植物的叶片放在通风处阴干。研磨时，所取叶片要除去粗的叶脉和叶柄。向研钵中加入少量二氧化硅和碳酸钙，进行研磨。待研磨充分后，再加入少量氯化钠和适量丙酮，就出现了深绿色的液体，液体经脱脂棉过滤后就得到了墨绿色的色素滤液。 2．划滤液细线 用毛细吸管吸取色素滤液，采用毛笔的执笔方式握住毛细吸管，悬腕，沿滤纸条上的铅笔划线作快速的划动，重复2～3次，就可以得到细、匀、齐的滤液细线。 3．分离色素 （1）采用小试管法 取长15cm、直径15mm的小试管，试管塞用橡皮塞。在橡皮塞的中央用刀片刻一细槽，然后将划过滤液细线的滤纸条无色素的一端，插入橡皮塞的细槽中。向小试管内加入3．5ml层析液，将滤纸条慢慢地垂直插入层析液中，橡皮塞要塞紧小试管。注意滤液细线不能没及层析液。 （2）采用培养皿法 不用滤纸条，也不划滤液细线，而取直径为10cm的干燥圆形定性滤纸，用毛细吸管吸取色素滤液，在滤纸的中央点成圆形的色素斑。重复4～5次。然后取一枚缝衣针，穿一条细棉线，在棉线末端打个结，将针穿过滤纸上的色素斑中心，在距线结约4cm处剪断棉线。取直径l0cm的培养皿一套，向培养皿底中加入5ml层析液。把上述圆形滤纸扣在培养皿底上面，无线结的一面朝下，棉线则浸没在层析液中。再将培养皿盖盖在滤纸上。采用该方法，可以看到色素随层析液由线结处向周围均匀扩散。因此得到的4条色素带呈同心环状，十分清晰。而且层析时，滤纸上的色素不会没及层析液中，点色素斑比划滤液细线容易得多，实验效果非常显著。 纸层析 定义： 以滤纸为固定相支持物的层析分离系统 首先要了解什么叫分配层析；分配层析是利用混合物中各组分在两种不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法。分配系数是指一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达到平衡时，该溶质在两种溶剂中所具有浓度之比。不同的物质因其在各种溶剂中的溶解度不同，因而也就有不同的分配系数。分配层析中应用最广泛的多孔支持物是滤纸，其次是硅胶、硅藻土、纤维素粉、淀粉和微孔聚乙烯粉等。下面主要介绍纸层析。 　　纸层析是以滤纸为惰性支持物。滤纸纤维和水有较强的亲和力，能吸收22％左右的水，而且其中6~7％的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，在一般条件下较难脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱，所以一般的纸层析实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂为流动相，当流动相沿纸经过样品