基因克隆1.ppt

现代分子生物学 1967年DNA连接酶的发现 基因工程的开拓者和创始人——保罗·伯格 1972年美国分子生物学家P．伯格将动物病毒SV40的DNA与噬菌体P22的DNA连接在一起，构成了第一批重组体DNA分子。 基因工程之父——科恩和博耶 1973年,美国分子生物学家S.N.科恩和H.W.博耶进行合作分别将几种不同的外源DNA插入质粒pSC101中，并进一步将它们引入大肠杆菌中，从而开创了遗传工程的研究。 1976年博耶成功运用DNA重组技术制成人的生长激素，并创立Genentech公司，从此引发了70年代末、80年代初的基因工程工业化的热潮。 1973年，Cohen等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落TcrNer，标志着基因工程的诞生。 3.l DNA重组技术 DNA重组技术是将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 * * 生命科学技术系 王红霞 1962年，阿尔伯发现大肠杆菌对外来侵入的DNA有限制作 用。从而预言了DNA限制性内切酶的存在。 1968年，斯密思分离出第一个内切酶。 1971年，纳赞应用斯密思的内切酶切割SV-40病毒的DNA， 获得了第一个DNA的内切图谱。 三人共享了1978年的诺贝尔生理医学奖。 阿尔伯（W·Arber） 限制性内切酶之催生者 斯密思（H·O·Smith） 限制性内切酶之接生者 纳赞（D·Nathans） 限制性内切酶之启用者 Tetracycline pSC101 EcoR I DNA Ligase Kanamycin R6-5 Kanr and Tetr cNDA 文库的构建 受精卵原核显微注射法 严格地说，DNA重组技术并不完全等于基因工程，因为后者还包括其他可能使生物细胞基因组结构得到改造的体系。 1973年美国科学家Cohen开创了体外重组DNA的技术，并成功用于转化大肠杆菌。 基因工程包括： DNA重组技术 基因的表达技术 基因的突变技术 基因的导入技术 其中DNA重组技术是基因工程的核心技术。 DNA重组技术的应用前景 它可被用于大量生产某些多肽；如：凝血因子、抗胰蛋白酶等。 用于定向改造某些生物的基因组结构。如遗传病的基因治疗、生产避孕疫苗、乙肝疫苗、可溶性丝蛋白。 用于基础研究。 如果说，分子生物学研究的核心是遗传信息的传递和控制，那么根据中心法则，我们要研究的就是DNA到RNA，再到蛋白质的全过程，也即基因的表达与调控。在这里无论是对启动子的研究，还是对转录因子的克隆及分析，都离不开重组DNA技术的应用。 超净工作台 离心设备 台式高速冷冻离心机 恒温空气摇床 恒温培养箱 培养皿 恒温水浴锅