核酸的降解与核苷酸代谢【参考】.docVIP

9核酸的降解与核苷酸代谢 ? 第十一章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢　 11.1核酸的酶促降解?11.1.1核酸酶?11.1.2脱氧核糖核酸酶?11.1.3限制性内切酶11.2核苷酸分解代谢?11.2.1核苷酸的降解?11.2.2嘌呤的降解?11.2.3嘧啶的降解11.3核苷酸的生物合成?11.3.1核糖核苷酸的合成?11.3.2脱氧核苷酸合成 　 第十一章 核酸的降解与核苷酸代谢 ? 11.1 核酸的酶促降解核酸的酶促降解生物体内存在着多种降解核酸的酶类，这些酶在核酸彻底降解及周转中起着重要作用。 核酸在各种核酸酶的催化下，逐步降解为多核苷酸、寡核苷酸，和单核苷酸： 单核苷酸的进一步分解需要另外一些酶的催化，最终生成核糖或脱氧核糖以及嘌呤碱和嘧啶碱。这些碱基的分解则又经过另外的酶进行催化，最终生成代谢终产物而排出体外或进行再利用。 分解核酸的酶类根据其作用于核酸的部位分为内切核酸酶(endonuclease)和外切核酸酶(exonuclease)。根据对底物的专一性又分为核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)、脱氧核糖核酸酶(dexyribonuclease，DNase)，两者统称为核酸酶(nuclease)，具有位点识别专一性的内切酶又称限制性内切酶。 11.1.1核酸酶 核酸酶既可作用于RNA，也可作用于DNA。 外切核酸酶 外切核酸酶作用于核酸链的一端，逐个水解下核苷酸。它们是非特异性的磷酸二酯酶，如蛇毒磷酸二酯酶是从DNA或RNA的游离3′-羟基端开始，逐个水解下5′-核苷酸；牛脾磷酸二酯酶则相反，从游离5′-羟基端开始，逐个水解下3′-核苷酸 内切核酸酶 内切核酸酶特异地水解多核苷酸内部各键，它们是特异性强的磷酸二酯酶，如牛胰核酸酶作用于嘧啶核苷酸的磷酸二酯键，生成嘧啶核苷-3′-磷酸或末端为嘧啶核苷-3′-磷酸的寡核苷酸。其专一作用于RNA，对DNA及其它磷酸二酯化合物不作用或作用活性很低。牛胰RNase具有高度热稳定性。许多RNAase也都是如此。牛胰RNase(RNase Ⅰ)是最早分离纯化并结晶的第一个RNase，由124个氨基酸组成。 11.1.2 脱氧核糖核酸酶 脱氧核糖核酸酶专一水解DNA，作用方式作为内切酶，切断双链，或切断单链，作为外切酶有5′→3′切割或是3′→5′切割。例如牛胰脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ)，可切割双链和单链DNA，产物为5′-磷酸为末端的寡核苷酸，而牛脾脱氧核糖核酶(DNase Ⅱ)降解DNA产生3′-磷酸为末端的寡核苷酸。还没有发现有碱基专一性DNase，但是有序列专一性，这就是限制性内切酶(restriction endonuclease)。 11.1.3 限制性内切酶 W Arber，H Smith和D Nathans等人在1979年发现在某些细菌细胞内存在一类能识别一定序列并水解外源双链DNA的内切核酸酶，其特点是具有极高的专一性，能识别DNA双链上的特定位点，称为限制性内切酶(restriction? endonuclease)，也称限制酶(restriction? enzyme)。限制酶由于其在基因工程上的重要作用而受到重视。 细菌除具有限制酶外，还具有一种对自身DNA起修饰作用的甲基化酶。一种限制酶和其相应的修饰酶对底物DNA的识别和作用的部位是相同的。修饰酶使该部位上的碱基甲基化，从而使限制酶对这种修饰过的DNA不再起作用。在细胞中，限制酶的生物学功能在于降解外源侵入的DNA，但不降解经修饰酶甲基化保护的自身DNA。 限制酶具有很强的专一性。它们对底物DNA有特异的识别位点(或称识别序列)。这些位点的长度一般在4～8碱基对范围内。通常具有回文结构(palindromic structure)。切割后形成粘性末端(cohesive end)或平齐末端(blunt end)。 下面是大肠杆菌的一种限制酶EcoRI对DNA的识别顺序(箭头表示酶的作用点)和酶作用产物的粘性末端。 ↓ 3′……pCTTAAGp……5′?????????? 3′……pCTTAAp ???????????????Gp……5′ ↑ 环状或线状的双链DNA分子经限制酶作用后都形成线状双链DNA，每条单链的一端带有识别顺序中的几个互补碱基，这样的末端称为粘性末端。 限制酶的命名较为特殊。以EcoRI为例，第一个大写字母E为大肠杆菌的属名(Escherichia)的第一个字母，第二、三两个小写字母co为它的种名(coli)的头两个字母。第四个字母用大写R，表示所用大肠杆菌的菌株。最后一个罗马字表示从该细菌中分离出来的这一类酶的编号。 限制酶是DNA的分子剪刀，是DNA体外重组技术和进行大分子DNA分析的重要工具。它们的发现大大地促进了基因工