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大肠埃希氏菌O157：H7检测方法研究进展 摘要：大肠埃希氏菌O157∶H7 是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型, 可引起腹泻、出血性肠炎, 极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症, 死亡率高，因此快速准确地检测这种病原菌对预防和控制由其引起腹泻有着十分重要的作用。本文介绍了大肠埃希氏菌O157∶H7 实验室检测方法的研究进展，主要包括微生物学检验方法中的细菌分离培养和快速酶触反应法、免疫学检测法、ISO-GRID检测系统、免疫捕获LAMP法、PCR法、DNA探针技术等分子生物学方法。 关键词：大肠埃希氏菌O157∶H7、检测方法、研究进展 大肠埃希氏菌（E.Coli简称大肠杆菌）于1885年由德国科学家T。Escherich从健康婴儿粪便中分离并命名[1]。 根据毒力基因、致病性、致病机理、临床症状、流行病学特点和血清分型等，国际上将致泻性大肠埃希氏菌分为6类，即：肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）和肠集聚性大肠埃希氏菌（EAEC）以及近来发现的肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠埃希氏菌（ESIES）[2;3;4]。 大肠杆菌O157∶H7 是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型, 可引起腹泻、出血性肠炎, 极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症, 死亡率高[5]。于1982 年在美国被首次发现，此后在世界各地散发或地方流行，1996 年在日本大阪地区发生流行，患者逾万，死亡11 人，1999—2000 年在中国江苏、安徽等地发生了多起食源性感染O157:H7 事件，导致l77 人死亡[6;7]。世界卫生组织已将O157:H7 列为新的食源性病原菌。 一、大肠埃希氏菌O157:H7病原学特点 EHEC O157:H7 属于肠杆菌科埃希氏菌属，具有一般大肠杆菌的形态特征的同时又有区别于一般大肠杆菌的特征[8]： 为革兰氏阴性、无芽孢直杆菌，大多数菌株以周生鞭毛运动； 在普通营养琼脂培养基上为光滑型菌落，有光泽，湿润，灰白色； 最适生长温度为33-42℃，37℃繁殖迅速，44-45℃生长不良，45.5℃停止生长； 不耐热，在75℃一分钟即可被杀灭；对氯敏感，在有效氯含量0.4 ppm 以上的水体中难以存活； 具有较强的耐酸性，pH2.5-3.0，37℃可耐受5小时； 温度低于5 ℃的环境中生存，在-20 ℃可存活9 个月； 可产生大量的Vero毒素（VT），也称作类志贺氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子，SLT抗力很高，经80 ℃处理30 min 仍具有活性； 发酵多种碳水化合物，但不发酵或迟缓发酵山梨醇，也不能产生葡萄糖酸苷酶。 大肠埃希氏菌O157:H7流行特点和临床症状特点 2.1流行特点 O157：H7的感染和暴发流行多发生在发达国家, 但我国近年来多数省市已有该菌的检出和感染病例报告,局部暴发流行和散发病例时有发生。目前该菌的感染无论在发达国家还是发展中国家, 都受到广泛关注。 1.季节性：，主要发生在夏秋两季，春冬季发病相对较少，7 月到8 月为发病高峰期，此外，雨季也是感染的易发季节。 2.地区分布：多发生于发达国家，主要以散发性为主。 3.易感人群：儿童5-9岁、老人50-59岁明显高于其它年龄组，最小3个月，最大85岁。 4.宿主：是一种动物源性传染病，奶牛，尤其是放牧的小牛是其主要储存宿主，从腹泻患者、畜禽粪便、市售肉类以及猪、鸽、鸡、鸭等动物中也有分离到O157:H7 的报道[9]。 5.传播途径：以食源性传播为主，水源性传播和接触传播也是重要的传播途径。牛肉、生奶、鸡肉及其制品，蔬菜、水果及制品等均可引起污染，其中牛肉是最主要的传播载体。 6.感染力：O157:H7 具有较强的感染力，一般大肠杆菌需要100 万个活菌才可引起发病，而O157:H7 只需100 到200 个活菌即可突破胃酸屏障，引发感染。 2.2临床症状 牛：是O157:H7 的主要携带者，但成年牛一般不会发病，只有犊牛才会出现腹泻症状。 猪：感染O157:H7后可导致水肿病，以头部，肠系膜和胃壁浆液性水肿为主要特征，且常伴有共济失调，麻痹或惊厥等神经症状，发病率较低但死亡率很高。 人：易感O157:H7 ，大多急性发病，常突然发生剧烈腹痛和非血性腹泻，数天后出现血性腹泻，低热或不发热。表现为水样便、粘液便或脓血便，在有的病例中，取得的粪便样品甚至是“只有血没有粪渣”，可见出血性腹泻的程度[7]。 三 、大肠埃希氏菌O157：H7的检验方法 大肠埃希氏菌O157:H7 感染已成为全球性的公共卫生和食品安全问题，对其进行快速、特异的检测对于该病的早期诊断及疫情有效控制至关重要。生物技术的