DNARNA蛋白质等各种生物物质的保存【参考】.docxVIP

各种生物活性物质的保存 /blog/Experience?2009-08-16 16:34:36?阅读336?评论0??字号：大中小?订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法：（网上搜索，仅供参考^_^）1.DNA 短期保存，两年之内吧，无菌水和TE缓冲液是ok的。如果是长期保存，比如10年20年的话，我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°，放10年没问题。需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。 长期保存用TE，DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存容易降解。保存两年应该会降解的！还是不要超过两年，再一年内都有降解的可能，所以还是要尽快的利用了。做成干粉不太可能，哪里有那么多的量！还是在－80度以下保存吧，也要避免反复冻融。 如果DNA很纯的话，应该影响不是很大啊，有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度，你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊，跑个电泳看看啊，如果出现smear，就不要用了啊！?? 提纯的DNA放在4度一段时间（数周-数月）都没问题。但是长期保存建议-20度，并且浓度不要稀释的太低，否则容易降解。2.RNA RNA若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。 保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g离心5分钟。 RNA即使是放在-80度下也会降解，所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。 提取的RNA保存在DEPC处理的水中，加入RNAse抑止剂，在-80度保存2个月，应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。 一旦生物样品被收集采摘，离体组织的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于样品采集过程中的应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR等实验来说，采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。记得以前学植物遗传的同学常常要带着液氮罐，骑着单车到田里采样——那个液氮罐的盖子有点问题，一颠就冒白烟，吓得一路上行人、车辆纷纷躲避，很是招摇，据说有一次觉得液氮不够了，赶着坐出租回来，那可是连哄带骗才上了的士，到学校时司机已经紧张得面无人色了——这真令贪玩的我们非常羡慕，只恨这等趣事怎么就落不到我们头上。对当事人来说，每周一次带着液氮罐到处跑实在不算一种有趣的经历。没有办法，为了保持样品的RNA完整真实，要么当场提RNA，要么液氮保存，一直如此。不过自从有了RNAlater，这种有趣的场面就会越来越少了。 RNAlater是特殊的样品储存液，只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂，RNlater可以迅速渗透到组织或其他生物样本中，稳定并保护RNA完整而不被降解，确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。样品储存液中保存的新鲜样品可以在不超过37度的高温天气下保存一天，或者在25度室温下保存一周；或者4度冰箱存放一个月；或者负20度长期保存而使RNA保持完整免受降解。这种技术为在不同温度和不同地点下的采样、运输和保存样品提供了极大的方便，同样适合手术/解剖过程中部分样品的保存。 RNAlater的用法非常简单，只要在采样后立即将样品完全浸入适量（10ul/1mg组织或者5倍体积）的RNAlater中即可。取样的动作要尽量快速利索，组织样品的大小以厚度不超过0.5公分为宜。对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中，较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块，以确保RNAlater 能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液，避免组织块挤在一起，同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。 保存在RNAlater中的样品RNA可以:· 37℃下稳定保存1天· 18-25℃保存7天· 2-8℃稳定4周· -20℃永久保存3.蛋白质 辛辛苦苦纯化得到的那么一点蛋白，可