实训五 样品中蛋白质含量的测定.docVIP

实训五、样品中蛋白质含量的测定 一、目的要求： 1、理解蛋白质测定仪各部分的构成和工作原理。 2、掌握用此仪器测定蛋白质含量的方法。 二、仪器、用具、试剂： 分析天平：感量0.0001g； 实验室用粉碎机或研钵； 酸式滴定管：25ml或10ml 锥形瓶：容积250ml； 分样筛：孔径0.45mm 40目 盐酸（HCI）：分析纯（GB622）0.05moI/L标准液，（4.2ml盐酸，注入1000ml蒸馏水）碳酸钠法标定盐酸。 氢氧化钠（NaOH）：化学纯（GB629）、40g溶于蒸馏水中溶成100ml，配成40%水溶液（m/v）。 硼酸（H3BO3）：分析纯（GB628）2g，溶于蒸馏中水配成100ml 2%水溶液（m/V）。 混合指示剂：甲基红（G5H15N3O2）（HG3—958）溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二种溶液等体积混合，阴凉处保存（保存期三个月以内）。 硫酸铜（CuSO4·5H2O）分析纯（GB665）10g；硫酸钾（K2SO4）（HG3—920）分析纯150g，在研钵中研磨，仔细混匀过40目筛（加速剂）。 浓硫酸 H2SO4 化学纯（GB625）（含量98%、无氮）。 三、样品制备 1 选取有代表性的样品，挑拣干净，按四分法缩减取样，粉碎至40目筛通过，装于密封容器中。（取样不少于200g） 2 液体试样，必须有代表性，取样后，先放在消化管内浓缩至体积（三分之一）再加入加速剂及硫酸进行消化。 四、操作步骤： 1 消化操作：详称取0.3-1g样品，2-5mL干净无损地转入清洗干净的消化管中，加入加速剂约5g加入浓硫酸8-25mL。将装有试样的消化管放在消化炉支架上，套上毒气罩，压下毒气罩锁住二面拉钩。把支架连同装有试样的消化管一起移到电热炉上保持消化管在电炉中心，设定温度在420-500，保持消化管中液体连续沸腾，沸酸在瓶颈部下冷凝回流，待溶液消煮至无微小碳粒，呈兰绿色时，再继续消煮30-40分钟。消化结束后，戴上手套，将毒气罩及消化炉支架连同消化管一同移回消化炉支架托座上，冷却至室温。 2 蒸馏 （1） 蒸馏前准备 a. 接通进水口（21）、排水口（19、20）注意排水胶管出水口，不得高于仪器底平面，同时关闭排水阀门（18）。 b. 接通电源，电源线内必须有良好的接地线，同时必须保持同仪器相同（注意接通电源时，必须关闭总电源开关 2 、汽 3 、碱 4 开关）。 c. 进液胶管 13、14 分别插入蒸馏水筒和40%NaOH液筒（自备）。注意：二液筒口不得高于仪器底平面。 （2） 蒸馏操作 a. 开自来水给水龙头，使自来水经过给水口进入冷凝管。注意水流量以保证冷凝管起到冷却作用为止。 b. 开总电源开关 2 ，待红色指示灯 1 亮，开汽开关直至蒸汽导出管（7）放出蒸汽，关汽开关。 c. 在蒸馏导出管托架 10 上，放上已经加入适量（15ml左右）的接收液（硼酸和混合指示剂）的锥形瓶。使蒸馏导出管的末端浸入接收液内。 在消化完全冷却后的消化管内，逐个加10ml左右蒸馏水稀释样品，如微量蒸馏，先将消化液移至定容瓶内定容，然后按需移液至消化管内。 e．压下消化管托架（9），将消化完全冷却后的消化管套在防溅管密封圈 6 上，稍加旋转使其保持接口密封，拉下防护罩。 f. 加碱：开碱开关，加入适量NaOH溶液至蒸馏液碱性颜色变黑为止，关碱开关。 注意：如仪器连续数天停止使用，必须先吸空胶管和碱泵内的碱液，然后用10﹪的盐酸或硼酸溶液过滤胶管和碱泵；再用蒸馏水过滤一次即可 。 g. 开汽开关，开始蒸馏，直至氨气全部蒸出（全量蒸馏接收液体积约为150ml；微量蒸馏接收液体积约为100ml）。先将接收瓶取下，取洗瓶将蒸馏水冲洗接收管。再关汽开关。 3 滴定：吸收氨后的接收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由兰绿色变为灰紫色为终点。同时做空白测定：用0.1g糖代替样品或不加样品作空白测定。 4 测定结果计算： 粗蛋白质% （V2-V1）×C×0.0140×K ×100 W×V′÷V 式中：V2 —滴定试样时消耗酸标准溶液的体积（ml）。 V1 —滴定空白时消耗酸标准溶液的体积（ml）。 V —试样分解液总体积（ml）。 V′—试样分解液蒸馏用体积（ml）。 C —酸标准溶液的mol/L浓度。 K —氮换算成粗蛋白质的系数 W —试样重量（g）。 0.0140—氮的毫克当量数。 平行测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位。