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大肠杆菌 参照食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157：H7∕NM检验GB∕T 4789.36-2008进行鉴定： 1、改良EC肉汤(mEC+n)用途：用于0157选择性增菌(GB2008标准) 配方：（g/L） 胰蛋白胨 乳糖 三号胆盐 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 氯化钠 pH值6.9±0.1 20.0 5.0 1.12 4.0 1.5 5.0?? 25 原理： ????? ?胰蛋白胨提供碳氮源；氯化钠可维持均衡的渗透压；乳糖是可发酵的糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂；三号胆盐和新生霉素能抑制通常在食品中存在的杂菌。 用法： ?????? 称取本品36.62g加热溶解于?1000ml蒸馏水中分装三角瓶每瓶225ml121℃高压灭菌15分钟冷至50后每225ml培养基中加入一支改良EC肉汤抑菌剂(含新生霉素4.5mg)混匀备用。 质量控制： 在36±1培养18-24小时。 质控菌株 菌株编号 生长情况 其它特征 大肠埃希氏O157菌 ATCC35150 +++ 产气 大肠埃希氏菌 ATCC25922 +++ 产气 金黄色葡萄球菌 ATCC25923 - ?/ 改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂改良山梨醇麦康凯琼脂添加剂 产品用法：每200ml改良山梨醇麦康凯琼脂中添加1支。 保存：2-8℃，有效期：一年 O157显色培养基用途：用于O157菌的显色培养，O157菌显亮红色、淡红色或红色大肠杆菌O157显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、病人粪便样品中O157菌的快速检测。O157菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色；其它细菌显黄色或无色。本培养基的特异性高，可以克服SMAC培养基引起的假阳性和假阴性结果，是一种很理想的快速检测培养基。 成份 (g/L) 特殊营养物质 50.0 混合显色剂 2.5 琼脂 15.0 pH 7.0 ± 0.1 25 CT 添加剂1ml/支*5 此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。 注意此培养基仅供实验室使用。 用法 称取本品1g加入200ml蒸馏水，加热煮沸溶解并不停搅拌，加热10-20分钟。冷却至45-50时，加入CT添加剂混匀，倾入无菌平皿。 注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在37的培养箱中倒置放置1-2小时。 贮存 制备好的平板可保存2-5天，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度2-8，注意避光保存。 失效 干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。 操作步骤 按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液； 、取25克样品液加入225ml mEC肉汤或mTSB肉汤中，37增菌培养18-24小时； 、用3mm接种环取1环增菌液，划线接种到O157菌显色培养基上，做2个平板； 、37培养18-24h，O157:H7菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色，其它细菌显黄色或无色； 、对典型菌落可做O157:H7菌血清学试验和全套生化试验。 质量控制 、外观 此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡蓝色。制备好的平板呈蓝色色固体培养基。 、微生物试验 在36±1培养18-24h小时： 质控菌株 ATCC 生长情况 菌落颜色 大肠杆菌 O157 +++ 紫色 金黄色葡萄球菌 25923 -/+ 黄色 大肠杆菌 25922 +++ 暗蓝色 沙门氏菌 +++ 蓝色 奇异变形杆菌 +++ 无色 方法的局限性 本培养基对典型大肠杆O157:H7必须做血清学试验或生化试验。 典型特征 典型O157:H7菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色。 三糖铁（TSI）琼脂 —2010进行鉴定： 1、缓冲蛋白胨水（BPW） 四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养，需加入煌绿和碘液 配方：（g/L） 牛肉粉 蛋白胨 氯化钠 碳酸钙 胆盐? 硫代硫酸钠 pH值??8.4?±?0.2???? 4.5 9.0 2.7 40.5 5.0 50.0 25 原理： ????? ?蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源和维生素满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；碳酸钙能中和细菌产酸及吸收有毒的代谢产物；硫代硫酸钠和四硫磺酸钠结合可抑制肠道共生菌(四硫磺酸钠是在培养基加入碘和碘化钾时形成)，而具有四硫磺酸钠还原酶的细菌能在此培养基中繁殖；胆盐可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性杆菌。 用法： ??????? 称取本品93.55g溶解于1050ml蒸馏水中加热煮沸临用前加入20%碘