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乳酸杆菌对黄曲霉生长抑制的研究_唐雨蕊 中国饲料 2008 年第 5 期 黄曲霉作为一种常见的病原菌, 不仅污染食 品和饲料, 并可引发人类和动物多种疾病。黄曲霉 的次级代谢产物黄曲霉毒素 (aflatoxins, AFTS)具 有很强的毒性, 被认为有致癌性、致突变、致畸性、 抑制免疫力, 并可引起肝部损伤等危害。目前, 多 采用物理或化学的方法解决黄曲霉对食品和饲料 的污染问题, 但这些方法不仅不能完全除去毒素, 反而会降低食品和饲料的营养价值。 近年的研究表明, 某些乳酸杆菌可抑制霉菌 的生长和产毒 ( 张柏林等, 2005)。Gourama 和 Bullerman(1995) 发现, 嗜酸乳酸杆菌、保加利亚 乳酸杆菌和植物乳酸杆菌可抑制寄生曲霉的孢子 萌发。本试验从健康动物体内分离抗黄曲霉活性 的乳杆菌, 不仅能添加在饲料中, 起到生物防霉的 作用, 并且能在动物体内定植, 为进一步研究开发 饲料生物防霉剂提供菌种资源。 1 材料与方法 1.1 材料 黄曲霉菌 SA0206( 由四川农业大学植物病理 实验室提供); 鸡源乳酸杆菌 1 株( 由四川农业大 学动物微生态实验室提供); MRS 培养基、PDA 培 养基、糖发酵培养基和生化鉴定培养基, 参照凌代 文和东秀珠(1999)、东秀珠和蔡妙英(2001) 方法 配制。 1.2 试验方法 1.2.1 乳酸杆菌分离培养 取健康奶牛的新鲜粪 样, 称取 0.5 g 加入装有 49.5 mL 灭菌生理盐水的 三角瓶中, 混匀后进行 10 倍递增稀释到 10 -6 。取 10 -4 、10 -5 、10 -6 稀释度的混悬液分别划线到 MRS 固体培养基上, 于 37 ℃培养 36 ～48 h, 根据菌落 特征挑取似乳酸杆菌的菌落涂片镜检, 选择 G + 杆 菌划线于 MRS 固体培养基上, 进一步纯化培养 后, 于 4 ℃冰箱保存备用。 1.2.2 乳酸杆菌属的鉴定 通过过氧化氢酶, 硝 酸盐还原, 明胶液化和硫化氢试验的结果来确定 并筛选出乳酸杆菌属的菌种 ( 东秀珠和蔡妙英, 2001)。 1.2.3 孢子悬液的制备 将霉菌接种在 PDA 斜 乳酸杆菌对黄曲霉生长抑制的研究 四川农业大学动物医学院微生态研究中心 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 [摘要] 从 7 株分离自健康奶牛粪样的乳酸杆菌及鸡源乳酸杆菌 B30 中筛选对黄曲霉生长有明显抑制作用乳酸 杆菌, 采用混悬涂布法测试这几株乳酸杆菌对黄曲霉孢子萌发的影响。结果显示, 鸡源乳酸杆菌 B30 和牛源乳酸杆 菌 BN3 均能较明显的抑制黄曲霉生长, 并且对黄曲霉的孢子萌发有抑制作用。通过生化鉴定和 16S rRNA 序列分 析, 鉴定两菌株均为植物乳酸杆菌。 [关键词] 乳酸杆菌; 黄曲霉; 抑制; 鉴定 [中图分类号] S816.3 [文献标识码] A [文章编号] 1004- 3314(2008)05- 0042- 04 [Abstract] Seven strains of Lactobacillus isolated and identified from the fresh excrements of healthy cows, and Lac- tobacillus B30 isolated from chicken were selected for detecting the antifungal activity to Aspergillus flavus on the growth and the viability of spores through spread plate method.According to the results of traditional identification and 16S rRNA gene sequencing, Lactobacillus B30 and BN3 were identified as Lactobacillus plantarum. [Key words] Lactobacillus; Aspergillus flavus; inhibition; identification 唐雨蕊 倪学勤 * 曾 东 基 金 项 目 : 教 育 部 长 江 学 者 和 创 新 团 队 发 展 计 划 (IRT0555) * 通讯作者 资源开发利用 422008 年第 5 期中国饲料 面, 28 ℃培养 10 d 后, 加入一定量的无菌磷酸盐 缓冲液[含 0.05 %(V/V) 的吐温 80], 用接种针挑 取斜面上的孢子到缓冲液中, 然后将含有霉菌孢 子的磷酸盐溶液通过无菌纱布过滤以除去菌丝残 体。用无菌磷酸盐缓冲液将孢子浓度调整为 10 5