实验2-1动物肝脏DNA提取案例.pptVIP

5．吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预冷），产生沉淀。 6.再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去上清液 (沉淀用80％乙醇溶液离心洗涤)。 7．将沉淀置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然干燥后，加入200ul 电极缓冲液，使DNA充分溶解，待用。 8.凝胶板的制备： （1）取琼脂糖0.7 g，加1×TBE缓冲溶液100ml，于沸水浴中至熔化，制成0.7%的琼脂糖胶液。 （2）胶床两头贴上防水胶带，形成8mm高的挡墙，压紧胶带，置水平台面上。 （3）插入梳子，梳齿下端离板底0.5－1mm。 （4）在胶床上滴加2－3滴 0.5μg/mL的EB溶液。 （5）将60℃凝胶不间断倒入胶床，高3－4mm，避免气泡，摇匀，室温下凝固。 （6）完全凝固后，撕掉胶带，置于电泳槽中，加入电泳缓冲液，高于胶面1－2mm，从一头轻轻斜拉出梳子，除去产生的气泡。 9.加样： 将样品DNA溶液与加样缓冲液以5 ：1的体积比混合，用微量移液器加样，每加完一个样品，冲洗三次。加样量15～20 ?l （加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝胶底部）。 10.电泳： 为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不应高于5V/cm（两电极间的距离）开始时用较高电压(80V)，样品一进入胶内则将电压调至5V/cm 。当染料前沿移至底边1-2mm时，电泳毕。 11.