实验一蛋白质的定量测定案例.pptVIP

取2支试管，各加入一定量的血清稀释液(已经稀释100倍，其蛋白质含量在酪蛋白标准曲线范围之内)，本实验取0.2ml血清稀释液，再加入0.8ml蒸馏水使样品体积达到lml。其他操作与“标准曲线的制作”相同。 2.血清蛋白质浓度的测定 反应物 (ml) 0（空白对照管） 1 2 血清稀释液 (已经稀释100倍) 0 0.2 0.2 蒸馏水 ml 1.0 0.8 0.8 Folin-酚甲ml 5.0 5.0 5.0 Folin-酚乙ml 0.5 0.5 0.5 A (640nm) 蛋白质浓度 (mg/L) 0 混匀后30度水浴锅中放置10 min 取3支试管 加Folin乙后立即摇匀，30分钟后以0号试管为空白对照，在640nm处比色 3、数据处理 1、绘制标准曲线：以A500为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上或用EXCEL绘制标准曲线。 2、计算特测蛋白浓度：用待测蛋白质的A500从标准曲线上查出其对应的蛋白含量，据实验中所加入的待测蛋白质的体积计算其浓度。 100 10 100 / (g) -6 640 ＊ ＊ ＝ 血清稀释倍数 数 测定时用稀释血清的 含量 值对应标准曲线蛋白质 血清 蛋白质 ml A ml 722分光光度计： 1.开电源预热20分钟 2.调波长 3.用黑体调T值(透光率）为0% 4.用对照管的溶液调A值（吸光率）为0%。 5.测各浓度的标准蛋白质